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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

[求助] 基因组DNA 酶切后条带不清晰,什么原因啊? 已有6人参与

各位虫友,我提取的腺病毒基因组DNA,用Fsp I 酶切后条带很不清晰,不知道是什么原因,酶切体系是50ul,其中酶2ul,泳道1是marker,泳道2 是其他样品,泳道3 的DNA 是10ug,泳道4  20ug,泳道5 40ug,37℃,酶切过夜,约17h,谢谢大家了!

基因组DNA 酶切后条带不清晰,什么原因啊?
IMG_20140822_122802.jpg
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2014-08-22 17:28:40
1,从你的图中可以看出,样品DNA序列中可能有多个酶切位点,因此切出几条弱带及弥散。
2,其次,这个酶酶切的时间需要根据要求设定,普通酶切一般45分钟到2个小时足够了,你的样品过夜酶切,不晓得温度是否会对你的 ...

1、理论上应该切出13条带,也不应该是这么弱的或者弥散的呀;
2、切的是基因组DNA,不是质粒载体,不知道会不会切不完全,依你看这个结果有可能是DNA降解造成的吗?
3、根据酶的说明书,30ul体系用1000ngDNA,实际电泳效果不好,条带非常弱,不清晰,所以做了梯度
4楼2014-08-23 15:51:32
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xm_liu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-22 20:56:29
我做过用双酶切切基因组的  是一片弥散的条带
但没做过用单酶切的 而且病毒没研究过
2楼2014-08-22 15:17:31
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xm_liu(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-22 20:56:41
1,从你的图中可以看出,样品DNA序列中可能有多个酶切位点,因此切出几条弱带及弥散。
2,其次,这个酶酶切的时间需要根据要求设定,普通酶切一般45分钟到2个小时足够了,你的样品过夜酶切,不晓得温度是否会对你的样品造成降解。
3,酶切样品为什么用不同浓度?根据酶的说明书来配比酶切体系和样品DNA即可哈。
3楼2014-08-22 17:28:40
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xm_liu: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢! 2014-08-26 16:24:12
你的上样量不到10 μg吧。有些酶不能酶切甲基化的酶切位点。
5楼2014-08-24 10:18:14
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