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林默泪

新虫 (初入文坛)

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[求助] NI柱纯化后没有酶活已有1人参与

我用的是PET28a，在BL21中表达，破碎上清测酶活是有的，过ni柱后，跑蛋白电泳，可以看出基本是目的蛋白，但是，酶活基本上可以说是没有。
求高手指点下~~

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1楼 2014-08-21 10:59:16

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君扬1989

铁杆木虫 (著名写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 林默泪 at 2014-08-26 09:02:53
37度培养4小时后，IPTG（0.5mM）30度诱导9小时。
纯化的时候，梯度洗脱测试下。然后每个梯度（50,100,200,250,300,400等）的样跑个电泳。我是用5mM咪唑平衡，20咪唑可以洗下大部分杂蛋白，然后50mM咪唑再洗下剩下 ...

好非常感谢我试试~