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林默泪

新虫 (初入文坛)

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[求助] NI柱纯化后没有酶活已有1人参与

我用的是PET28a，在BL21中表达，破碎上清测酶活是有的，过ni柱后，跑蛋白电泳，可以看出基本是目的蛋白，但是，酶活基本上可以说是没有。
求高手指点下~~

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1楼 2014-08-21 10:59:16

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zero19871029

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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林默泪(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-21 15:33:22
林默泪: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢~~ 2014-08-22 08:08:40

我也遇到过这种问题，原因很简单，就是镍离子的毒害作用，洗脱蛋白的时候镍离子也残留在溶液中，要保持蛋白活性的话最好透析浓缩一下，另外罗氏再卖一款镍柱是免毒害的，没用过不知道好不好用

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