酶纯化后没有活性 - 分子生物 - 综合其他 - 小木虫论坛-学术科研互动平台

windsor2011

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是否是因为纯化过程中温度的问题

只要功夫深铁杵磨成针

2楼2012-08-23 09:32:46

jackenmickey

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3楼2012-08-23 09:39:13

windsor2011

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哦，那就看看你纯化用的试剂是否对你的酶有干扰。

只要功夫深铁杵磨成针

4楼2012-08-23 10:18:13

jackenmickey

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5楼2012-08-23 10:48:28

tiani_tan

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需要分析一下纯化过程中是否引入了酶活力抑制剂之类的

6楼2012-08-23 12:28:42

jackenmickey

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7楼2012-08-23 12:41:44

daguo0648

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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:51:23

引用回帖:

5楼: Originally posted by jackenmickey at 2012-08-23 10:48:28
我用Ni柱进行纯化的，洗脱杂蛋白用的是30mM咪唑，目的蛋白是400mM咪唑，难道是咪唑对我的酶活有影响吗？...

咪唑对酶活是有影响的，何况是在400mM咪唑这么高的浓度，你需要查一下，该酶在什么体系下使用活性最好，然后把蛋白透析到带体系中，通常酶的使用是要加入甘油的，最好含有1~2mMDTT保护其活性。你的现象肯定是纯化后的体系对酶活有影响，透析后会好的。

小小爬虫

8楼2012-08-23 16:22:12

101202139

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应该就是咪唑的问题，我们纯化后的酶都是要去咪唑的！

9楼2012-08-24 10:53:08

jackenmickey

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10楼2012-08-26 20:09:13