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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】氧气会不会使某些酶失活？？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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彤彤0122

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】氧气会不会使某些酶失活？？ 已有6人参与

我现在在表达一个酶，在大肠中，基因已经表达，而且是可溶性的，但是没有酶活，有的文献上说这个酶对氧气敏感，诱导和反应全要在厌氧条件，基因来源是厌氧梭菌，和我的基因来源是同一属的。氧气会不会是对酶有那么大的影响呢？
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1楼 2010-06-21 10:31:06
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琴瑟不鸣

铁虫 (小有名气)
这个真不一定啊
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老虎
2楼2010-06-21 10:56:43
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lovehpw

金虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1):固氮酶 2010-06-21 16:23:01
氧气会使某些酶失活的
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3楼2010-06-21 13:31:32
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
有些酶不能接触氧的
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4楼2010-06-21 17:54:10
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zhouhou

捐助贵宾 (小有名气)
有些酶对温度，氧气，ph值是很敏感的，所以你可以看下
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5楼2010-06-21 18:58:05
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月月大可

木虫 (著名写手)
可能会影响半胱氨酸，从而影响二硫键的形成
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6楼2010-06-21 19:05:30
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彤彤0122

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-21 19:05:30:
可能会影响半胱氨酸，从而影响二硫键的形成

那我想再问一下，要是影响二硫键，是不是我诱导的时候也要厌氧啊？那有没有可能氧破坏了他的二硫键以后，有什么方法可以让他复性吗？
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7楼2010-06-22 10:11:52
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月月大可

木虫 (著名写手)
彤彤0122(金币+10): 2010-06-23 13:40:25
诱导厌氧大肠杆菌就不会生长了！

我们平常蛋白纯化的时候都会加β巯基乙醇或者DTT，再或者TCEP。前两者都是可以保持蛋白中半胱氨酸出于还原状态，但是这二者室温下pH8.0的时候半衰期非常短，几个小时吧。所以当这些还原剂慢慢失效的过程中，蛋白逐渐趋于正确折叠。

TCEP可以打开已经形成的二硫键，但是这种东西非常贵 Hampton的1g装的要46$,加关税后汇率都算到9-10。工作浓度1mM，这么1g的东西配不了几升溶液。

你该先确定是不是半胱氨酸的原因再调整试验。   听说过Rosetta gami这个菌株，这个菌株敲出了两个氧化性的酶，用来表达高半胱氨酸的蛋白是个不错的选择，但是长的非常慢。

[ Last edited by 月月大可 on 2010-6-22 at 18:08 ]
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8楼2010-06-22 17:31:44
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彤彤0122

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-22 17:31:44:
诱导厌氧大肠杆菌就不会生长了！

大肠是兼性厌氧的，我厌氧做的，它能长到OD0.6，然后就不大长了。
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9楼2010-06-22 18:06:08
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彤彤0122

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-22 17:31:44:
诱导厌氧大肠杆菌就不会生长了！

我们平常蛋白纯化的时候都会加β巯基乙醇或者DTT，再或者TCEP。前两者都是可以保持蛋白中半胱氨酸出于还原状态，但是这二者室温下pH8.0的时候半衰期非常短，几个小时吧。所以当 ...

其实我现在觉得是二硫键被氧气破坏掉也是文献上说的，文献上是厌氧诱导，但是厌氧诱导非常麻烦，还得不断调整PH，破壁什么都很麻烦。
你说用DTT，那样的话能恢复二硫键吗？
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10楼2010-06-23 13:46:37
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