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彤彤0122

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】氧气会不会使某些酶失活?? 已有6人参与

我现在在表达一个酶,在大肠中,基因已经表达,而且是可溶性的,但是没有酶活,有的文献上说这个酶对氧气敏感,诱导和反应全要在厌氧条件,基因来源是厌氧梭菌,和我的基因来源是同一属的。氧气会不会是对酶有那么大的影响呢?
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彤彤0122

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-21 19:05:30:
可能会影响半胱氨酸,从而影响二硫键的形成

那我想再问一下,要是影响二硫键,是不是我诱导的时候也要厌氧啊?那有没有可能氧破坏了他的二硫键以后,有什么方法可以让他复性吗?
7楼2010-06-22 10:11:52
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彤彤0122

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-22 17:31:44:
诱导厌氧大肠杆菌就不会生长了!

大肠是兼性厌氧的,我厌氧做的,它能长到OD0.6,然后就不大长了。
9楼2010-06-22 18:06:08
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彤彤0122

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-22 17:31:44:
诱导厌氧大肠杆菌就不会生长了!

我们平常蛋白纯化的时候都会加β巯基乙醇或者DTT,再或者TCEP。前两者都是可以保持蛋白中半胱氨酸出于还原状态,但是这二者室温下pH8.0的时候半衰期非常短,几个小时吧。所以当 ...

其实我现在觉得是二硫键被氧气破坏掉也是文献上说的,文献上是厌氧诱导,但是厌氧诱导非常麻烦,还得不断调整PH,破壁什么都很麻烦。
你说用DTT,那样的话能恢复二硫键吗?
10楼2010-06-23 13:46:37
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