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[交流]
【求助/交流】氧气会不会使某些酶失活？？ 已有6人参与
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| 我现在在表达一个酶，在大肠中，基因已经表达，而且是可溶性的，但是没有酶活，有的文献上说这个酶对氧气敏感，诱导和反应全要在厌氧条件，基因来源是厌氧梭菌，和我的基因来源是同一属的。氧气会不会是对酶有那么大的影响呢？ |
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月月大可
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彤彤0122(金币+10): 2010-06-23 13:40:25
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诱导厌氧大肠杆菌就不会生长了！ 我们平常蛋白纯化的时候都会加β巯基乙醇或者DTT，再或者TCEP。前两者都是可以保持蛋白中半胱氨酸出于还原状态，但是这二者室温下pH8.0的时候半衰期非常短，几个小时吧。所以当这些还原剂慢慢失效的过程中，蛋白逐渐趋于正确折叠。 TCEP可以打开已经形成的二硫键，但是这种东西非常贵 Hampton的1g装的要46$,加关税后汇率都算到9-10。工作浓度1mM，这么1g的东西配不了几升溶液。 你该先确定是不是半胱氨酸的原因再调整试验。 听说过Rosetta gami这个菌株，这个菌株敲出了两个氧化性的酶，用来表达高半胱氨酸的蛋白是个不错的选择，但是长的非常慢。 [ Last edited by 月月大可 on 2010-6-22 at 18:08 ] |
8楼2010-06-22 17:31:44
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lxj341401
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