24小时热门版块排行榜    

查看: 1163  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

林默泪

新虫 (初入文坛)

[求助] NI柱纯化后没有酶活 已有1人参与

我用的是PET28a,在BL21中表达,破碎上清测酶活是有的,过ni柱后,跑蛋白电泳,可以看出基本是目的蛋白,但是,酶活基本上可以说是没有。
求高手指点下~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

summerliehu

银虫 (小有名气)

请问一下你破碎的上清是怎么测的酶活?
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★欢迎访问【时间管理】版————管理时间,走向成功★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
3楼2014-08-21 14:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
林默泪(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-21 15:33:22
林默泪: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢~~ 2014-08-22 08:08:40
我也遇到过这种问题,原因很简单,就是镍离子的毒害作用,洗脱蛋白的时候镍离子也残留在溶液中,要保持蛋白活性的话最好透析浓缩一下,另外罗氏再卖一款镍柱是免毒害的,没用过不知道好不好用
2楼2014-08-21 14:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林默泪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by summerliehu at 2014-08-21 14:42:53
请问一下你破碎的上清是怎么测的酶活?

与底物反应会产生丙酮酸,然后丙酮酸和2,4-二硝基苯肼反应在碱性条件下会有棕红色的产物,然后测吸光度和标准曲线来计算。
4楼2014-08-22 08:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

君扬1989

铁杆木虫 (著名写手)

请问 我的蛋白表达量不是很高,您在表达蛋白时,所用的条件是如何的?还有,我的蛋白纯化后,条带不是单一的,这种情况如何处理?谢谢~
5楼2014-08-22 09:53:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂285 +7 吕仔龙 2026-02-28 7/350 2026-03-01 16:04 by hmn_wj
[考研] 材料化工调剂 +9 今夏不夏 2026-03-01 10/500 2026-03-01 16:01 by hmn_wj
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +3 15779376950 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:27 by 15779376950
[考研] 291分工科求调剂 +8 science饿饿 2026-03-01 9/450 2026-03-01 14:22 by Ducount.Y
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[考研] 0805总分292,求调剂 +3 幻想之殇 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:11 by yc258
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见