应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » NI柱纯化后没有酶活
51/1返回列表
查看: 1171  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

林默泪

新虫 (初入文坛)

[求助] NI柱纯化后没有酶活 已有1人参与

我用的是PET28a，在BL21中表达，破碎上清测酶活是有的，过ni柱后，跑蛋白电泳，可以看出基本是目的蛋白，但是，酶活基本上可以说是没有。
求高手指点下~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-21 10:59:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林默泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 君扬1989 at 2014-08-22 09:53:09
请问 我的蛋白表达量不是很高，您在表达蛋白时，所用的条件是如何的？还有，我的蛋白纯化后，条带不是单一的，这种情况如何处理？谢谢~

37度培养4小时后，IPTG（0.5mM）30度诱导9小时。
纯化的时候，梯度洗脱测试下。然后每个梯度（50,100,200,250,300,400等）的样跑个电泳。我是用5mM咪唑平衡，20咪唑可以洗下大部分杂蛋白，然后50mM咪唑再洗下剩下的大部分杂蛋白。然后200mM咪唑洗脱，这样就差不多纯了。不过我自己的柱子好像已经不太好用了，吸附量不高，我用别人的用过，还是不错的。
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-26 09:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
林默泪(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-21 15:33:22
林默泪: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢~~ 2014-08-22 08:08:40
我也遇到过这种问题，原因很简单，就是镍离子的毒害作用，洗脱蛋白的时候镍离子也残留在溶液中，要保持蛋白活性的话最好透析浓缩一下，另外罗氏再卖一款镍柱是免毒害的，没用过不知道好不好用
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-21 14:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

summerliehu

银虫 (小有名气)
请问一下你破碎的上清是怎么测的酶活？
赞一下 回复此楼
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★欢迎访问【时间管理】版————管理时间，走向成功★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
3楼2014-08-21 14:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林默泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by summerliehu at 2014-08-21 14:42:53
请问一下你破碎的上清是怎么测的酶活？

与底物反应会产生丙酮酸，然后丙酮酸和2，4-二硝基苯肼反应在碱性条件下会有棕红色的产物，然后测吸光度和标准曲线来计算。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-22 08:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭