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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增严重弥散，但是以前用同样方法，条件和试剂都是结果非常好的
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lilongping

新虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增严重弥散，但是以前用同样方法，条件和试剂都是结果非常好的 已有5人参与

大家看看我这个PCR图片是什么原因呢？
PCR条件是：94° 60s， 52°60s，72° 5min， 扩增循环35圈，用的是3步PCR实验的。这个程序我一直在用，模板是细菌基因组。前一段时间用同样的PCR方法，试剂，模板等等都是一样的，扩增出来了目的条带，实验结果非常好。最近，我想重复这个实验，再做一些回收回来测序用，但是，怎么重复，都是这种严重弥散啊，大家看看这种情况应该怎么办呢？

前后用的PCR条件和试剂都是完全一样的。

两边最边上的3个泳道都是不同大小的DNA分子量标准Marker，他们是清醒可见的。

PCR扩增严重弥散，但是以前用同样方法，条件和试剂都是结果非常好的
2014-08-14  5个12_5扩增失败.jpg
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1楼 2014-08-17 21:43:51
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kkzzll0624

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶，镁离子，dntp的浓度，很关键，换个新酶，核实这几个试剂的浓度，重新试试吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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好好学习，天天向上！
9楼2014-08-19 08:46:41
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owl2010

金虫 (正式写手)
是不是模板有降解，电泳看一下模板有没有问题。
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男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
2楼2014-08-18 12:13:27
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vapordw

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lilongping(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:50:31
既然条件跟试剂都一样，差不多也就是模板有问题了吧
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3楼2014-08-18 14:38:55
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lilongping(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:50:39
酶量太大，延伸时间短，你修改一下在跑一次试试，
拖带很严重。
赞一下 回复此楼
任重道远……
4楼2014-08-18 15:21:05
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