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冷雁孤旅木虫 (著名写手)
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[求助]
求助QPCR扩增效率的影响因素
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各位大侠，小弟在做QPCR（SYBR），在验证引物可用性的时候 1.使用的模板是普通PCR产物的模板（做的原核生物，为了节约CDNA）2 UL,按照10倍梯度稀释 2.引物浓度时200MM 3.退火温度是57.5℃ 4.扩增条件：95℃ 30 S (1 CYCLE), 95℃ 5S（40 CYCLES） ,57.5℃ 31 S 20UL 体系 结果：溶解曲线是单峰，但是扩增效率太高了，有的基因达到200%， 我想求教大侠：在不换引物的前提下：1.使用PCR产物模板，是否模板浓度太高会使得扩增效率降低？ 2.退火温度提高了，是否会使得扩增效率降低？@西瓜 @biostar2009 @孙启亮 @cicelyzh |
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