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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液pcr有结果，酶切没有，一定是假阳性吗？
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 菌液pcr有结果，酶切没有，一定是假阳性吗？ 已有7人参与

菌液pcr有亮亮的目的条带（用的M13通用引物），提质粒，浓度100左右，酶切过夜，没有目的条带，一定是假阳性吗？若送出去测序，是不是有点浪费？
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踏实
1楼 2014-07-23 15:16:58
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:55
直接送去测序就好了，或者送去测序同时再重复一次酶切
有时候酶切位点会丢失，但是你的ORF没受影响就没有问题
当然假若你是做亚克隆需要把目的基因再从你现在的载体里切出来的话，那如果真的丢失了酶切位点，就要重新做了
赞一下(1人) 回复此楼
下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
8楼2014-07-24 03:31:40
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geshujuan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:33:53
换新的电泳缓冲液，我之前也遇到过这种情况，换过电泳缓冲液就可以跑出带了！祝你实验顺利！
赞一下 回复此楼
我一定可以做的更好！！
2楼2014-07-23 16:59:01
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by geshujuan at 2014-07-23 16:59:01
换新的电泳缓冲液，我之前也遇到过这种情况，换过电泳缓冲液就可以跑出带了！祝你实验顺利！

嗯嗯，好的，我试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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踏实
3楼2014-07-23 17:25:33
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:04
菌落PCR既然有非常特异的亮带，扩增条带大小和你的理论值一致的话就直接测序吧
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
4楼2014-07-23 19:21:43
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