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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液pcr有结果，酶切没有，一定是假阳性吗？
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 菌液pcr有结果，酶切没有，一定是假阳性吗？ 已有7人参与

菌液pcr有亮亮的目的条带（用的M13通用引物），提质粒，浓度100左右，酶切过夜，没有目的条带，一定是假阳性吗？若送出去测序，是不是有点浪费？
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踏实
1楼 2014-07-23 15:16:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:55
直接送去测序就好了，或者送去测序同时再重复一次酶切
有时候酶切位点会丢失，但是你的ORF没受影响就没有问题
当然假若你是做亚克隆需要把目的基因再从你现在的载体里切出来的话，那如果真的丢失了酶切位点，就要重新做了
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
8楼2014-07-24 03:31:40
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要犹豫，直接测序。反正测不出来不要钱。
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我不会！
11楼2014-07-24 09:23:22
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普通回帖

geshujuan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:33:53
换新的电泳缓冲液，我之前也遇到过这种情况，换过电泳缓冲液就可以跑出带了！祝你实验顺利！
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我一定可以做的更好！！
2楼2014-07-23 16:59:01
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by geshujuan at 2014-07-23 16:59:01
换新的电泳缓冲液，我之前也遇到过这种情况，换过电泳缓冲液就可以跑出带了！祝你实验顺利！

嗯嗯，好的，我试试

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踏实
3楼2014-07-23 17:25:33
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:04
菌落PCR既然有非常特异的亮带，扩增条带大小和你的理论值一致的话就直接测序吧
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大家相互帮助哈
4楼2014-07-23 19:21:43
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胡亚梅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:19
不一定啊，有可能是酶切没有切好，可以直接测序，现在测序也不贵，我之前有测序真确，但是酶切死活切不下来的情况
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小虫虫~~
5楼2014-07-23 21:42:32
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:26
直接测序吧，有时酶切验证目的条带较弱的话可能跑胶就是看不出来，而且和你酶切的环境也有关系。另外测序不成功又不收费的

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天道酬勤
6楼2014-07-23 23:20:39
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:35
可能是假阳性，也可能扩增没有问题，但是酶切有问题，不管怎么说，还是去测一下序列为好，也好知道哪里出的问题。
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7楼2014-07-24 00:47:44
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 胡亚梅 at 2014-07-23 21:42:32
不一定啊，有可能是酶切没有切好，可以直接测序，现在测序也不贵，我之前有测序真确，但是酶切死活切不下来的情况

害怕是酶切的问题，我做了两次酶切，都没有东西。

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踏实
9楼2014-07-24 03:49:22
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-24 03:49:22
害怕是酶切的问题，我做了两次酶切，都没有东西。
...

测序的同时可以试着借别人的dna切一下，如果还是没切出来，那估计就是酶切的问题了。
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
10楼2014-07-24 04:36:28
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