应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达
101/1返回列表
查看: 1617  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

laolaohutu

银虫 (正式写手)

[求助] 片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达 已有2人参与

片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达，向各位请教下可能存在的原因？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

重组的景区

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
请享受无法回避的痛苦
1楼 2014-07-20 10:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-20 12:28:00
laolaohutu: 金币+5 2014-07-20 20:47:23
1、IPTG用的浓度是多少？诱导时间是多长？什么温度条件下？
2、n你的fusion protein有多大？
3、是否同时做对照？如GST的vector （假定你做的是GST fusion protein），对照有诱导否？。
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-20 10:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是如何判定你的蛋白没有表达的，跑了PAGE和空载对照目标处没目的条带？你的这个蛋白有没有其他检测办法，比如活性检测之类的，你的菌体破碎充分不？诱导条件不合适？
LZ你还是贴一个你的sds-page的图吧，要不然问题太多。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2014-07-20 12:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-20 12:29:45
你是如何判定你的蛋白没有表达的，跑了PAGE和空载对照目标处没目的条带？你的这个蛋白有没有其他检测办法，比如活性检测之类的，你的菌体破碎充分不？诱导条件不合适？
LZ你还是贴一个你的sds-page的图吧，要不然问 ...

和未诱导的相比在预测的分子量附近未见特异性条带，原先诱导了一个，但是是采用酶切，都能表达可溶性蛋白，
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
4楼2014-07-20 20:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-20 10:43:01
1、IPTG用的浓度是多少？诱导时间是多长？什么温度条件下？
2、n你的fusion protein有多大？
3、是否同时做对照？如GST的vector （假定你做的是GST fusion protein），对照有诱导否？。

就是和对照相比，在预测的分子量附近未见特异性的条带
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
5楼2014-07-20 20:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

younghe

铁虫 (小有名气)
你确定你的蛋白能够表达出来么，并不是每个基因插进去了，就能在E Coli中表达，或者说表达量非常低
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-21 16:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by younghe at 2014-07-21 16:23:32
你确定你的蛋白能够表达出来么，并不是每个基因插进去了，就能在E Coli中表达，或者说表达量非常低

这样   你有遇到过类似的情况吗？如果换其他表达菌是否有可能表达出来？
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
7楼2014-07-22 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

younghe

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by laolaohutu at 2014-07-22 10:21:53
这样   你有遇到过类似的情况吗？如果换其他表达菌是否有可能表达出来？...

换标签，或者换质粒，换菌效果不大
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-22 10:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caitlin0626

新虫 (正式写手)
诱导条件不对？

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
9楼2014-07-22 21:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by caitlin0626 at 2014-07-22 21:39:48
诱导条件不对？

原先同一家族的基因在一样的诱导条件下都能诱导出来  现在是搞不清问题在哪  很是奇怪
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
10楼2014-07-23 18:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 laolaohutu 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +8 吃吃吃才有意义 2026-03-19 8/400 2026-03-21 00:49 by 刘国森
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +3 ￣^￣゜汗 2026-03-19 4/200 2026-03-20 21:01 by zhukairuo
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭