应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达
101/1返回列表
查看: 1772  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

laolaohutu

银虫 (正式写手)

[求助] 片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达 已有2人参与

片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达，向各位请教下可能存在的原因？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

重组的景区

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
请享受无法回避的痛苦
1楼 2014-07-20 10:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-20 12:28:00
laolaohutu: 金币+5 2014-07-20 20:47:23
1、IPTG用的浓度是多少？诱导时间是多长？什么温度条件下？
2、n你的fusion protein有多大？
3、是否同时做对照？如GST的vector （假定你做的是GST fusion protein），对照有诱导否？。
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-20 10:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是如何判定你的蛋白没有表达的，跑了PAGE和空载对照目标处没目的条带？你的这个蛋白有没有其他检测办法，比如活性检测之类的，你的菌体破碎充分不？诱导条件不合适？
LZ你还是贴一个你的sds-page的图吧，要不然问题太多。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2014-07-20 12:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-20 12:29:45
你是如何判定你的蛋白没有表达的，跑了PAGE和空载对照目标处没目的条带？你的这个蛋白有没有其他检测办法，比如活性检测之类的，你的菌体破碎充分不？诱导条件不合适？
LZ你还是贴一个你的sds-page的图吧，要不然问 ...

和未诱导的相比在预测的分子量附近未见特异性条带，原先诱导了一个，但是是采用酶切，都能表达可溶性蛋白，
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
4楼2014-07-20 20:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-20 10:43:01
1、IPTG用的浓度是多少？诱导时间是多长？什么温度条件下？
2、n你的fusion protein有多大？
3、是否同时做对照？如GST的vector （假定你做的是GST fusion protein），对照有诱导否？。

就是和对照相比，在预测的分子量附近未见特异性的条带
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
5楼2014-07-20 20:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

younghe

铁虫 (小有名气)
你确定你的蛋白能够表达出来么，并不是每个基因插进去了，就能在E Coli中表达，或者说表达量非常低
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-21 16:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by younghe at 2014-07-21 16:23:32
你确定你的蛋白能够表达出来么，并不是每个基因插进去了，就能在E Coli中表达，或者说表达量非常低

这样   你有遇到过类似的情况吗？如果换其他表达菌是否有可能表达出来？
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
7楼2014-07-22 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

younghe

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by laolaohutu at 2014-07-22 10:21:53
这样   你有遇到过类似的情况吗？如果换其他表达菌是否有可能表达出来？...

换标签，或者换质粒，换菌效果不大
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-22 10:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caitlin0626

新虫 (正式写手)
诱导条件不对？

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
9楼2014-07-22 21:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by caitlin0626 at 2014-07-22 21:39:48
诱导条件不对？

原先同一家族的基因在一样的诱导条件下都能诱导出来  现在是搞不清问题在哪  很是奇怪
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
10楼2014-07-23 18:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 laolaohutu 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +7 羊腰板 2026-08-21 7/350 2026-08-21 21:28 by iwuli
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 14/700 2026-08-21 16:51 by applepetty
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭