应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达
51/1返回列表
查看: 1922  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)

[求助] 片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达 已有2人参与

片段采取无缝克隆重组后，测序结果正确，但用IPTG诱导后，都未见目的蛋白表达，向各位请教下可能存在的原因？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

重组的景区

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
请享受无法回避的痛苦
1楼 2014-07-20 10:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by younghe at 2014-07-21 16:23:32
你确定你的蛋白能够表达出来么，并不是每个基因插进去了，就能在E Coli中表达，或者说表达量非常低

这样   你有遇到过类似的情况吗？如果换其他表达菌是否有可能表达出来？
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
7楼2014-07-22 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-20 12:28:00
laolaohutu: 金币+5 2014-07-20 20:47:23
1、IPTG用的浓度是多少？诱导时间是多长？什么温度条件下？
2、n你的fusion protein有多大？
3、是否同时做对照？如GST的vector （假定你做的是GST fusion protein），对照有诱导否？。
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-20 10:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是如何判定你的蛋白没有表达的，跑了PAGE和空载对照目标处没目的条带？你的这个蛋白有没有其他检测办法，比如活性检测之类的，你的菌体破碎充分不？诱导条件不合适？
LZ你还是贴一个你的sds-page的图吧，要不然问题太多。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2014-07-20 12:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laolaohutu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-20 12:29:45
你是如何判定你的蛋白没有表达的，跑了PAGE和空载对照目标处没目的条带？你的这个蛋白有没有其他检测办法，比如活性检测之类的，你的菌体破碎充分不？诱导条件不合适？
LZ你还是贴一个你的sds-page的图吧，要不然问 ...

和未诱导的相比在预测的分子量附近未见特异性条带，原先诱导了一个，但是是采用酶切，都能表达可溶性蛋白，
赞一下 回复此楼
请享受无法回避的痛苦
4楼2014-07-20 20:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 12:52 by C6CRn66RYYXS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 12:30 by C6CRn66RYYXS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 12:19 by C6CRn66RYYXS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:35 by YHiw1gou1Eda
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:02 by YHiw1gou1Eda
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 10:51 by YHiw1gou1Eda
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 10:18 by YHiw1gou1Eda
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-10 09:23 by 1yv6QACPoY1E
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭