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biology-girl新虫 (正式写手)
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RNA 反转录后依然有内含子序列？ 已有3人参与
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| 如题，最近克隆一个基因，但是有内含子，遂提取RNA 后反转录，可是测序结果回来后发现还是有内含子序列。请问各位大侠 设施怎么回事？ 是我的方法操作有问题？还是NCBI 上公布的有问题（此基因以前没人克隆过） PS：没人克隆过那个基因，那NCBI 上的CDS 区 是怎么得来的？ 是不是NCBI上的不对呀？ |
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luwei13566
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-20 21:24:39
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-20 21:24:39
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1.有没有污染先看你的测序结果，你的基因有几个内含子？而你的测序结果又保留了几个内含子？如果你的基因里包含了NCBI上所预测的所有内含子那基因组污染的可能性非常大。如果只包含一个或一部分内含子，那基因组污染的可能性就已经排除了。琼脂糖胶是有个分辨率的，你肉眼看不到并不代表就没有。 2.你RT-PCR做完是连T载体吗？怎么快100个转化子里才这么点阳性，你用的是什么taq酶，连接体系是多少？基因与载体摩尔比又是多少？尽管你是分几次做的。但是你的阳性太少就没法排除偶然的错误剪切导致的mRNA前体的可能性。 |
9楼2014-07-20 14:26:53
2楼2014-07-19 09:21:52
yuehedou
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