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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE出问题啦，大侠帮忙分析分析
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pengchenping

铁虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE出问题啦，大侠帮忙分析分析 已有7人参与

第一次出现这种情况，Marker边上四个孔的样品上样30ul,后面两个10ul,后面两个开始跑的挺好的，到后面就被中间四个把其他条带挤压啦。而且中间的指示颜色没有压下来，是不是样品的问题啊，还是因为其他的原因

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1楼 2014-07-17 14:48:48
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 21:17:28
蛋白上样量不均衡，就好像大车在路中间，会把小车挤到路边一样，考虑同时成比例降低上样量。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-07-17 22:04:19
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 21:17:38
尽量使所有孔的上样量一致，这样才有可比性和说服力。
建议您重做一块板，此次上样量一致，在看看出没出现该情况，再讨论，这样才有价值。
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相信自己，永不言弃
3楼2014-07-17 22:30:09
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 21:17:47
我个人认为可能是凝胶里有气泡，或者凝胶厚度不均匀，或者凝胶混合时不够均匀导致聚合后密度不均一，所有导致了电流在凝胶里的方向和大小改变。
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4楼2014-07-17 22:41:03
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ymc捕儿

新虫 (小有名气)
上样量太大了吧？如果必须上30微升，那就把蛋白稀释了

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5楼2014-07-17 22:57:16
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llfxcy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 21:17:55
非常简单的一件事，用loading buffer补齐就可以。

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6楼2014-07-17 23:39:42
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 21:18:02
上样量差距太大了，样式前面四个必须是30的话，后面可以用1*Loading buffer 补齐就行了！
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不作死不会死！！！
7楼2014-07-19 17:05:49
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79377

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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跟上样量估计关系不大，应该是电流在不同地方不均一，缓冲液没漏吧？胶和电极之间没气泡吧？

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8楼2014-07-20 07:59:46
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zd1984hero

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

上样量为什么要有差别呢！应一样才行！出现的问题也不算问题，情理之中（因为其他的上样量太大了，所以一定会往两边挤）。
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学海无涯
9楼2014-07-21 15:14:39
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