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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE实验 胶的结果不好 帮忙分析一二
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答案24

木虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE实验 胶的结果不好 帮忙分析一二

今天做了个SDS-PAGE实验，样品是蛋白质，marker跑出来了，样品找不到了。胶怎么会这样，请各位大师指点一二。
SDS-PAGE实验   胶的结果不好   帮忙分析一二
图片1.jpg
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1楼 2013-08-28 23:33:40
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回帖置顶 ( 共有1个 )

ritchiejin

铜虫 (初入文坛)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
答案24: 回帖置顶 2013-08-29 14:33:01
你的胶是怎么配的？详细的过程！
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10楼2013-08-29 08:24:31
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wendy3

金虫 (文坛精英)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
Best wishes
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3楼2013-08-29 00:17:12
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muchfan

木虫 (知名作家)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
愿楼主心想事成
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4楼2013-08-29 00:17:15
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niu.bi

木虫 (文坛精英)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
Best wishes
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5楼2013-08-29 00:18:09
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seeforme

新虫 (知名作家)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
愿楼主心想事成
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6楼2013-08-29 00:19:12
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b729

金虫 (文坛精英)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
祝福楼主
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7楼2013-08-29 00:20:18
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beimi

木虫 (著名写手)
★ ★
答案24(金币+2): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 13:28:36
running gel 和 starking gel没有配好吧，你的胶没做好，
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8楼2013-08-29 04:43:41
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hym0411

木虫 (正式写手)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
楼主再接再厉，多做几次，倒胶后那个梳子是竖着插的吗？
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9楼2013-08-29 08:03:54
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2008101111

金虫 (正式写手)
★
答案24(金币+2): 谢谢参与
熟能生巧，灌胶不均匀，凝固时间不够
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11楼2013-08-29 09:28:47
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929519755

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 13:28:45
你染色 和 脱色都没有弄好 这是胶的问题
你蛋白看不到 可能是 跑出去了 或者是量太低 背景色过高 你看不出来
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12楼2013-08-29 11:02:26
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coca8831

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
制胶有问题，好像看不出来有上面的积层胶
另外 我习惯染色2小时，脱色过夜
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13楼2013-08-29 14:01:26
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答案24

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hym0411 at 2013-08-29 08:03:54
楼主再接再厉，多做几次，倒胶后那个梳子是竖着插的吗？

首先谢谢。是竖着插的，分离胶下部怎会有一段白的胶块啊
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14楼2013-08-29 14:09:40
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答案24

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ritchiejin at 2013-08-29 08:24:31
你的胶是怎么配的？详细的过程！

谢谢您的答复，分离胶缓冲液：18.15gTris  少许蒸馏水溶解，用1mol/LHCL调节至ph8.8.蒸馏水定容至100ml    浓缩胶缓冲液：6gTris,少许蒸馏水溶解，用1m HCL调ph至6.8 定容至100ml.   染色液：0.25g考马斯亮蓝R250，加入40ml甲醇，10ml冰醋酸    蒸馏水定容至100ml      脱色液：50ml甲醇  75ml 冰醋酸  875ml蒸馏水混合
望您帮忙分析一下  谢谢
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15楼2013-08-29 14:28:43
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ritchiejin

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by 答案24 at 2013-08-29 14:28:43
谢谢您的答复，分离胶缓冲液：18.15gTris  少许蒸馏水溶解，用1mol/LHCL调节至ph8.8.蒸馏水定容至100ml    浓缩胶缓冲液：6gTris,少许蒸馏水溶解，用1m HCL调ph至6.8 定容至100ml.   染色液：0.25g考马斯亮蓝R250， ...

看你的胶图上有marker的部分跑的有没有问题，如果和说明上跑出的条带分布一致，说明胶的浓度本身没有问题。但问题可能是出在染色的程序和脱色的程序上，感觉像是没染上。或者是下部的胶浓度出现问题了，浓度低了的话，有可能空隙太大。会不会是你跑胶的时间也不太对呢？
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16楼2013-08-31 11:02:31
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cqwhch2楼
2013-08-29 00:11   回复  
答案24(金币+2): 谢谢参与
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