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Hzhenping新虫 (小有名气)
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[求助]
求助Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法 已有4人参与
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去年下半年做了一段时间WB实验，前田再次做，只换了个一抗和细胞裂解液，其他都没变（当然目的蛋白也不同了）。去年能出条带，这次却不能了。。。 现将改变的试剂及可疑操作罗列如下，供大神分析并搭救  1.细胞裂解液：RAPI细胞裂解液（强），碧云天生物技术研究所； 2.一抗:Isotype, IgG; Host, Rabbit; Species Reactivity, Human, Rat。 二抗：Goat Anti-Rabbit IgG. 3.目的蛋白大小约21KD，内参用GAPDH，于27KD-18KD处剪膜。一抗用5%BSA1:1500稀释，37oC孵育90min；二抗用5%BSA1:3000稀释,37oC孵育90min。 4.DAB显色试剂盒显色。PVDF膜的熊样如下：A 今天做了点蛋白试验（有叫“点杂交”），膜泡甲醇，晾干；蛋白样品（4个）按20ug/10ul加2xLoading Buffer煮沸后点于膜上,干后封闭，孵一抗，二抗，显色。PVDF膜熊样如下：B、C。（白斑之间即为蛋白点样点，由于膜被封闭液和5%BSA浸透而呈现这样）  A.jpg  B.jpg  C.jpg |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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凌波丽
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