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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀 已有8人参与

各位虫友,请教westernblot的背景大家都是怎么消除的,180kD的蛋白转膜时间大家都用多少呀!谢谢

[ Last edited by dhd997 on 2010-11-27 at 08:42 ]
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jessica533

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 19:18:42
如果背景杂带多,我一般注意调整上样量不要太大, 另外延长封闭时间,用5%的脱脂奶粉封闭效果还是不错的,还有就是1抗后一定好好洗洗才加2抗反应。

我没有转过180kD的目的蛋白,不过在75V1h后,marker中250kD的条带也转的不错
把忧愁微掉,将快乐积起。
2楼2010-11-28 11:21:52
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yinsongna

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
背景重就多封闭会儿呗,用10%的奶粉37度封闭上4个小时
没转过那么大的蛋白,我15V,20min,100KD的marker就转的挺好的
3楼2010-11-28 12:38:42
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

谢谢 受教了
4楼2010-11-29 13:49:35
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

封闭时间不够吧
倚楼听风雨,淡看江湖路!
5楼2010-11-29 13:53:29
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

楼上的同学一般你封闭多久呀
6楼2010-11-30 20:54:52
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xhjggl

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
延长封闭时间
减少所加二抗的量
增加二抗温浴后的洗涤时间
封闭液中减少AP,生物素等的残留。
使用高效转移缓冲液,例如上海生工的PW039    10X High molecules western blot transfer buffer

[ Last edited by xhjggl on 2010-12-6 at 09:48 ]
7楼2010-12-05 15:21:24
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

8楼2010-12-06 21:59:36
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rivers_123

铁虫 (小有名气)

封闭时间不够,牛奶浓度低,或者一抗浓度太大,PBST洗的时间短
9楼2010-12-10 14:12:53
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nieyaru

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我一般是三条带一起做 相同的时间为啥有的深有的浅啊 ?
10楼2012-05-18 00:28:49
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