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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀已有8人参与

各位虫友，请教westernblot的背景大家都是怎么消除的，180kD的蛋白转膜时间大家都用多少呀！谢谢

[ Last edited by dhd997 on 2010-11-27 at 08:42 ]
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1楼2010-11-26 22:46:09
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jessica533

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 19:18:42
如果背景杂带多，我一般注意调整上样量不要太大， 另外延长封闭时间，用5%的脱脂奶粉封闭效果还是不错的，还有就是1抗后一定好好洗洗才加2抗反应。

我没有转过180kD的目的蛋白，不过在75V1h后，marker中250kD的条带也转的不错
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把忧愁微掉，将快乐积起。
2楼2010-11-28 11:21:52
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
背景重就多封闭会儿呗，用10%的奶粉37度封闭上4个小时
没转过那么大的蛋白，我15V，20min，100KD的marker就转的挺好的
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3楼2010-11-28 12:38:42
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)
谢谢 受教了
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4楼2010-11-29 13:49:35
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
封闭时间不够吧
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倚楼听风雨，淡看江湖路！
5楼2010-11-29 13:53:29
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)
楼上的同学一般你封闭多久呀
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6楼2010-11-30 20:54:52
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
延长封闭时间
减少所加二抗的量
增加二抗温浴后的洗涤时间
封闭液中减少AP，生物素等的残留。
使用高效转移缓冲液，例如上海生工的PW039    10X High molecules western blot transfer buffer

[ Last edited by xhjggl on 2010-12-6 at 09:48 ]
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7楼2010-12-05 15:21:24
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)
谢谢
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8楼2010-12-06 21:59:36
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rivers_123

铁虫 (小有名气)
封闭时间不够，牛奶浓度低，或者一抗浓度太大，PBST洗的时间短
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9楼2010-12-10 14:12:53
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nieyaru

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一般是三条带一起做 相同的时间为啥有的深有的浅啊 ?
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10楼2012-05-18 00:28:49
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