应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请做过westernblot实验的战友前来赐教
231/1返回列表
查看: 3268  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

2011加油

银虫 (正式写手)

[交流] 请做过westernblot实验的战友前来赐教

最近我在做westernblot实验，遇到一些问题，特发此贴，以求指导。
1、由于我提的是核蛋白，浓度很低，上样体积受到梳子孔径的限制，所以蛋白的上样量只有几个微克左右。现在要问的是，大家提取核蛋白，种细胞时，是采用6孔板还是培养皿种板呢？

2、在进行ECL发光实验时，发现膜上有荧光，但压片曝光后，发现胶片上只有膜的黑印记，却无任何条带，求解释？？

望大家不吝赐教，非常感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-22 09:36:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hf2016

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢回答 2011-10-22 10:42:46
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-22 15:26:08
我们用的培养瓶为了增加上样量都用五乘

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-10-22 10:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢，希望继续多帮忙分析。 2011-10-22 14:28:04
曝光时间长了吧？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-10-22 13:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 青豆同学 at 2011-10-22 13:15:59:
曝光时间长了吧？

大概2-3min，这应该不算久啊。
赞一下 回复此楼
5楼2011-10-22 14:26:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 这是经验！ 2011-10-23 11:05:54
2011加油(金币+1): 谢谢回答 2011-10-23 20:49:41
2011加油(金币+1): 2011-12-26 22:19:55
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-22 14:26:00:
大概2-3min，这应该不算久啊。

我这边一般都是曝光10秒左右，黑乎乎的一片，应该是跟曝光时间有关
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-10-23 10:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 青豆同学 at 2011-10-23 10:08:25:
我这边一般都是曝光10秒左右，黑乎乎的一片，应该是跟曝光时间有关

哦，请问你的蛋白上样量是多少，分子量大小及转膜条件？
赞一下 回复此楼
8楼2011-10-23 12:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢啊 2011-10-25 19:09:45
5Xloading buffer会有所帮助
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-10-23 18:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jakelly

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢回答啊 2011-10-23 20:30:41
2011加油(金币+1): 2011-12-26 22:18:49
用宽的梳子做样品孔可以增加上样量，条带的问题很可能是暴光时间太长。我们一般压10秒左右，最多一两分钟。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-10-23 19:20:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jakelly at 2011-10-23 19:20:07:
用宽的梳子做样品孔可以增加上样量，条带的问题很可能是暴光时间太长。我们一般压10秒左右，最多一两分钟。

这位朋友你好，我想问一下，即使没看到荧光的情况下，曝光时间也是这么短？？？
赞一下 回复此楼
13楼2011-10-23 20:28:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-10-23 18:08:34:
5Xloading buffer会有所帮助

热变性蛋白前，每次都用到了。
赞一下 回复此楼
14楼2011-10-23 20:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongxiaomin

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢啊 2011-10-23 22:14:40
首先可一选用大孔径的梳子来增加上样量，其次可以减少Loadingbuffer的体积;检查显影试剂有没有问题
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2011-10-23 21:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢支持 2011-11-09 22:20:25
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-23 12:50:32:
哦，请问你的蛋白上样量是多少，分子量大小及转膜条件？

我明天去给你问问，我不做这方面的，但跟着参观过，我同事做
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2011-10-23 22:41:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jakelly

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢啊 2011-10-24 08:17:34
引用回帖:
13楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-23 20:28:29:
这位朋友你好，我想问一下，即使没看到荧光的情况下，曝光时间也是这么短？？？

我们如果看不到荧光，就压一两分钟，应该就能出来，要不就可没有条带了，需要改变别的条件。你们用的ECL是什么公司的？我们用的加强型的Pierce的。
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2011-10-24 00:35:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by jakelly at 2011-10-24 00:35:13:
我们如果看不到荧光，就压一两分钟，应该就能出来，要不就可没有条带了，需要改变别的条件。你们用的ECL是什么公司的？我们用的加强型的Pierce的。

我看到瓶子上也有pierce字样。
赞一下 回复此楼
18楼2011-10-24 08:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

frank213

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 好的，谢谢您的建议 2011-10-24 08:34:46
是啊，缓冲液调整，曝光时间调整
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2011-10-24 08:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxq999

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜:编辑内容 2011-10-24 17:48
-------------广告内容-----------------
该虫多次发布广告，为了避免版主刷管理记录的嫌疑，不再每个帖子单独扣分，而是分几次重罚。请自重，勿扰乱论坛的正常交流！

[ Last edited by 西瓜 on 2011-10-24 at 17:48 ]
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2011-10-24 17:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveerobin

木虫 (职业作家)
2011加油(金币+1): 谢谢你 2011-10-24 19:59:57
我也出现过类似的情况
多重复两次
加油
赞一下 回复此楼
21楼2011-10-24 18:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by loveerobin at 2011-10-24 18:14:46:
我也出现过类似的情况
多重复两次
加油

会的，这个实验还在继续，仍在调整和排查一些因素，希望下次做的结果好一些
赞一下 回复此楼
22楼2011-10-24 19:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨独步

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
2011加油(金币+1): 谢谢回答 2011-10-26 08:15:57
我们压过的最短曝光时间是5s。。。
赞一下(1人) 回复此楼
23楼2011-10-25 20:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
大轰炸4楼
2011-10-22 14:08   回复  
2011加油(金币+1): 谢谢顶贴 2011-11-09 13:47:09
2011加油6楼
2011-10-22 19:39   回复  
mlanqiang9楼
2011-10-23 14:22   回复  
2011加油(金币+1): 谢谢顶帖 2011-11-09 13:47:32
2011加油11楼
2011-10-23 18:39   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 2011加油 的主题更新
231/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +4 scalable 2026-08-24 4/200 2026-08-24 16:22 by truewz
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +16 koalala 2026-08-24 18/900 2026-08-24 15:43 by zhuzg0628
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +12 kulium 2026-08-21 15/750 2026-08-24 12:02 by iaeyuan
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭