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韩元富豪

金虫 (小有名气)

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[求助] 我的目的基因上添加的两个酶切位点和T载体上的酶切位点相同，怎么办已有1人参与

1.我的目的基因上添加的两个酶切位点和T载体上的酶切位点相同，怎么办i
添加的酶切位点是HindIII和Kpn I，
2.我想不构建克隆载体，直接构建表达载体，所以想ＰＣＲ完后，不进行TA克隆，我用的是Thermo 的酶，我想问一下，载体和ＰＣＲ片段双酶切后，用连接酶连起来，２５℃，３ｈ后，是直接涂板呢，还是跑电泳，跑电泳我怎么看不着条带（我们的凝胶成像仪只能用肉眼看），是不是连接完后，直接涂抗性板子

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【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题已经有13人回复

1楼 2014-07-06 09:55:42

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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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韩元富豪(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-06 17:46:28

1.你的PCR产物可以连到连到T-simple载体上，这个上面没有多克隆位点
2.PCR产物也可以直接双酶切连接转化后涂板，不需要跑电泳

2楼2014-07-06 10:54:35

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