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ylian0

木虫 (小有名气)

[求助] 不知道我的多重PCR哪里出问题了?请高手指教! 已有1人参与

根据参考文献进行的PCR扩增,阳性菌株条带正常,待测菌株有一些正常检出,一些只能检测出部分基因。

25μl反应体系,用的takara的预混酶,94℃,4min。94℃,30s;59℃,30s;72℃,45s--10循环。94℃,30s;52℃,30s;72℃,45s--25循环。72℃,10min。

我检测的目的基因有金黄色葡萄球菌16s基因(756bp),耐甲氧西林mecA基因(310bp)。

MARKER条带从上到下分别为:1000,700,500,400,300,200,100.

1-6号都是金黄色葡萄球菌,1、2号都有16s的目的条带,但是3-6号只有mecA基因的扩增条带(我用单重PCR方法单独扩增16s,可以扩增得到所有的目的条带)

请问大家有什么改进的建议呢?

不知道我的多重PCR哪里出问题了?请高手指教!
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ylian0(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:18:07
单重PCR方法单独扩增mecA基因呢?如果也有,可能加引物出现问题。建议改变引物比例或作个优化。
学习使你立于不败之地
2楼2014-07-02 17:16:53
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ylian0

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-07-02 17:16:53
单重PCR方法单独扩增mecA基因呢?如果也有,可能加引物出现问题。建议改变引物比例或作个优化。

多重mecA基因扩增都没问题的,现在问题是出在16s上,主要是阳性没问题,待测菌里面,也有一些是可以检测出来的,这个还是引物浓度的问题

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-03 08:14:36
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