应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于荧光定量PCR扩增曲线的疑问
51/1返回列表
查看: 2394  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhpu2008

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于荧光定量PCR扩增曲线的疑问 已有3人参与

各位大侠好，近两天做荧光定量PCR，但扩增曲线，有的正常，有的不正常，甚至是三个重复里面就差别较大，深蓝色是3个重复，浅蓝色是3个重复，有图附上，大家看看，帮忙分析原因，谢谢！

关于荧光定量PCR扩增曲线的疑问
quxian.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-28 09:10:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taccycle

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 15:55:39
依我看这个图是因为背景循环数和阈值设置的不好，你尝试更改一下阈值线和背景循环数看看
赞一下(2人) 回复此楼
用心
7楼2014-07-01 15:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

茂林修竹7

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhpu2008(西门吹雪170代发): 金币+5, 鼓励回帖交流 2014-06-28 13:05:06
Real Time PCR根据其原理，可以在PCR体系里加入荧光染料或者用特异性的荧光探针。我经常用的是前者，你的应该也是。
荧光染料法，对引物的要求还是挺高的，根据你的扩增曲线，排除加样过程中的误差，我认为 你的引物不好。
建议你做Relatime之前，最好先把引物检测一下。Relatime检测，就是一个引物准备两个上样孔，A.正常加样；B.把cDNA换成定量的H2O，看溶解曲线。好的引物溶解曲线，A孔只有一个峰，B孔没有峰。
另外加样的时候，最好混合一个体系，计算好用量，一个孔一个孔的分装，微量的如引物最好不要单独加，这样误差很大的。
图片是我做的，你可以参考下。
关于荧光定量PCR扩增曲线的疑问-1
扩增曲线.jpg


关于荧光定量PCR扩增曲线的疑问-2
溶解曲线.jpg
赞一下(3人) 回复此楼
将欲取之必先与之
2楼2014-06-28 10:40:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by 茂林修竹7 at 2014-06-28 10:40:49
Real Time PCR根据其原理，可以在PCR体系里加入荧光染料或者用特异性的荧光探针。我经常用的是前者，你的应该也是。
荧光染料法，对引物的要求还是挺高的，根据你的扩增曲线，排除加样过程中的误差，我认为 你的引 ...

做qPCR时候，设计引物之后，最好是要验证引物的非特异性（只有一个峰的溶解曲线），才能开始正式试验吧？
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2014-06-28 13:07:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

茂林修竹7

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Beryl_xu at 2014-06-28 13:07:40
做qPCR时候，设计引物之后，最好是要验证引物的非特异性（只有一个峰的溶解曲线），才能开始正式试验吧？...

是的。
回复此楼
将欲取之必先与之
4楼2014-06-28 20:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 13/650 2026-08-10 16:22 by naalan7001
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +16 且听虎啸 2026-08-07 23/1150 2026-08-10 12:35 by majunge000
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭