应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为何定量PCR扩增曲线不规则
131/2返回列表12下一页
查看: 2457  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

apple6299

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】为何定量PCR扩增曲线不规则 已有6人参与

各位兄弟姐妹，Taq-Man法检测我的目的基因，内参扩增曲线正常，但是目的基因扩增曲线不光滑，是什么原因啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-16 17:16:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apple6299

铁杆木虫 (正式写手)
                            如图

[ Last edited by apple6299 on 2010-10-16 at 17:18 ]
赞一下 回复此楼
2楼2010-10-16 17:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sn198651

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢参与 2010-10-16 19:06:42
你的是一步法还是两步法啊
加体系的时候会不会离心管里有气泡

如果气泡很多 曲线肯定不规则
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-10-16 18:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taigongzaici

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-10-17 09:59:29
1.加样不准确
2。气泡作祟
3，你这是一个模板的重复？还是不同模板你没做重复，只是预实验


建议
1，换成好的枪头和八连管，建议AXYGEN
2，多做重复，最少五个，保证准确性，也可以修正的余地
3，混合分装一定要均匀，这是非常非常重要的，特别是模板！！！！
4，八连管的摆放位置，和你设计的程序一定要吻合
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-10-17 09:07:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apple6299

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by apple6299 at 2010-10-16 17:17:16:
                            如图

[ Last edited by apple6299 on 2010-10-16 at 17:18 ]

是两步法，先提RNA反转成cDNA之后，才用我的目的基因进行扩增的！因为瞬时离心后，确保反应液全部在毛细管下部，可以排除毛细管有气泡的因素
赞一下 回复此楼
5楼2010-10-17 12:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apple6299

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sn198651 at 2010-10-16 18:37:50:
你的是一步法还是两步法啊
加体系的时候会不会离心管里有气泡

如果气泡很多 曲线肯定不规则

是两步法，先提RNA反转成cDNA之后，才用我的目的基因进行扩增的！因为瞬时离心后，确保反应液全部在毛细管下部，可以排除毛细管有气泡的因素
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2496005
赞一下 回复此楼
6楼2010-10-17 12:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apple6299

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by taigongzaici at 2010-10-17 09:07:49:
1.加样不准确
2。气泡作祟
3，你这是一个模板的重复？还是不同模板你没做重复，只是预实验


建议
1，换成好的枪头和八连管，建议AXYGEN
2，多做重复，最少五个，保证准确性，也可以修正的余地
3，混合分 ...

这个只是预实验，不同模板的，后来每个模板做了3哥重复，还是出现如此状况。我的实验步骤是先把体系的其他样全部加在同一个EP管，然后进行分装，最后加不同的模板（模板量是一样的，加5ul,因为模板稀释过）。反应管不是八连管，只是进口的单个毛细管。机子是罗氏的LightCycler2.0.
赞一下 回复此楼
7楼2010-10-17 12:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sn198651

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎回帖交流 2010-10-21 21:35:09
2步法的FQ-PCR没做过
我现在都是用一步法的做

2步法的我们只用在常规RT-PCR中
是不是手提RNA不稳定的原因 测过浓度么
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2010-10-21 21:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
CT值稍稍的有一点点的高

把你的重复情况发上来看看，复孔怎么样？
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-10-22 08:40:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-22 09:52:12
浓度很低，看这情况都只有10的三次方拷贝，曲线当然不会很光滑
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2010-10-22 09:08:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 apple6299 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 7/350 2026-11-08 22:39 by l48hFd8Nwae2
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 21:51 by l48hFd8Nwae2
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭