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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用同样的引物、同样的体系、同样的条件做出不同的结果，是怎么回事？
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three姚

银虫 (小有名气)

[求助] 用同样的引物、同样的体系、同样的条件做出不同的结果，是怎么回事？ 已有4人参与

如题，两次实验除了模板其他都是一样的，但是结果有天壤之别。前一次P出来有一点杂带，但是目标条带很亮；这一次引物二聚体很明显，但是24个样品中只有12个P出条带了，而且目标条带很暗。增加模板用量后引物二聚体变暗了一点，但是目标条带还是很暗。前一次的模板是用PowerSoil的试剂盒提的，条带很亮，没有杂质；这次的24个模板是用上海生工的试剂盒提的，电泳时都有条带，但是条带都很暗，而且泳道底部都有杂质。想问问大家，这次结果不好真的是跟模板有关吗？要不要根据模板来调整反应体系和条件呢？
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思念是一棵没有年轮的树，永不老去
1楼 2014-06-26 18:09:14
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2979529

至尊木虫 (知名作家)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-06-27 16:41:43
温度 天气 湿度什么的一样么  貌似就没有一模一样的实验
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2楼2014-06-26 18:30:33
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
three姚(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-27 16:41:54
模板浓度一样吗？浓度高了的话pcr也不容易扩出来
再就是电泳跑胶的条件：胶的配制、电泳液更换
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3楼2014-06-26 19:03:39
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three姚

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2979529 at 2014-06-26 18:30:33
温度 天气 湿度什么的一样么  貌似就没有一模一样的实验

温度和湿度肯定是不一样的，我说的一样是指那些可以人为调控的因素
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思念是一棵没有年轮的树，永不老去
4楼2014-06-26 20:13:28
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three姚

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-06-26 19:03:39
模板浓度一样吗？浓度高了的话pcr也不容易扩出来
再就是电泳跑胶的条件：胶的配制、电泳液更换

条带暗的话应该5是说明浓度比较低吧？跑胶的电压和时间、胶的浓度、电泳液的浓度都是一样的
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思念是一棵没有年轮的树，永不老去
5楼2014-06-26 20:14:58
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 15:26:48
两次实验比对一下不一样的地方，细微的地方也应该考虑在内，实验就是个细致活。
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6楼2014-06-27 08:56:04
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gaoxye

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

新虫给点建议：您自己分析的意见很到位了，就是提取试剂盒的不同引起的。不同试剂盒差异比较大，尤其是进口和国产的。我本人做肠道微生物也遇到过同样地问题，先是怀疑自己的条件和反应体系问题，但是做了很多优化还是不理想，问题就是模板，就是试剂盒的，好的试剂盒，效果当然更好，一分钱一分货！祝你成功！
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7楼2014-07-22 15:21:09
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