应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 引物设计保护碱基的选择
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 2894  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hero352

金虫 (小有名气)

[求助] 引物设计保护碱基的选择 已有4人参与

上游 保护碱基 GCTTGGAC     CATATG  nde1
下游  保护碱基CGCG    CTCGAG  xho
最近一直做基因克隆，可是载体和目的片段一直连不上，大家帮我看看是不是引物设计时保护碱基选不的合适，是不是切不开啊，酶切位点分别是NDE1和XHO1
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-11 21:44:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-11 23:36:39
你可以把片段连在t载体上，再切下来，不必加保护碱基

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-11 22:17:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 我们一般是3个，没发现有太大的什么问题 2014-06-11 23:38:30
XhoI加3个保护碱基切20h效率约为75%，我一般都是加6个保护碱基。而且XhoI4个位点的连接效率低于其他位点，一般都是要长时间连接的。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2014-06-11 22:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
4楼2014-06-12 09:55:25
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

hero352

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-11 22:17:42
你可以把片段连在t载体上，再切下来，不必加保护碱基

我是高保真酶PCR，不能直接连T载体，如果PCR产物加A的话，不知道效率高不高
赞一下 回复此楼
5楼2014-06-12 21:36:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hero352

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-11 22:59:36
XhoI加3个保护碱基切20h效率约为75%，我一般都是加6个保护碱基。而且XhoI4个位点的连接效率低于其他位点，一般都是要长时间连接的。

切的时间太长会不会对DNA有影响啊，我以前用宝生物的常规酶一般也就切8个小时，明天准备换fermentase快酶来切，不知道切多长时间呢，说明书上似乎时间都很短
赞一下 回复此楼
6楼2014-06-12 21:41:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by hero352 at 2014-06-12 21:36:35
我是高保真酶PCR，不能直接连T载体，如果PCR产物加A的话，不知道效率高不高...

你这两种选择效率都不高

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-06-12 22:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hero352 at 2014-06-12 21:41:34
切的时间太长会不会对DNA有影响啊，我以前用宝生物的常规酶一般也就切8个小时，明天准备换fermentase快酶来切，不知道切多长时间呢，说明书上似乎时间都很短...

如果37度切8个小时我没试过，你切完检测过条带没，我37度最多切过5个小时，该切开的早就切开了。XhoI那4个位点的连接效率不太高，你连接体系怎么样？转化了后是没有转化子还是很多的假阳性？
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
8楼2014-06-12 22:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

愚者517

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有连上，一定是酶切问题，跑一下琼脂糖电泳看看，是否有三条带。
赞一下 回复此楼
9楼2014-06-13 08:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hero352 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +9 leaflight 2026-03-24 9/450 2026-03-29 14:18 by wxiongid
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +8 举个栗子oi 2026-03-24 9/450 2026-03-29 13:08 by peike
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 8/400 2026-03-29 12:48 by 无际的草原
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 海纳百川Ly 2026-03-29 5/250 2026-03-29 09:57 by Sjndkwm
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +8 Koxui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 09:50 by laoshidan
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +9 辰沐5211314 2026-03-26 9/450 2026-03-29 01:12 by 我是小康
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +12 路痴小琪 2026-03-27 12/600 2026-03-28 15:41 by L135790
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭