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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 引物设计保护碱基的选择
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hero352

金虫 (小有名气)

[求助] 引物设计保护碱基的选择 已有4人参与

上游 保护碱基 GCTTGGAC     CATATG  nde1
下游  保护碱基CGCG    CTCGAG  xho
最近一直做基因克隆，可是载体和目的片段一直连不上，大家帮我看看是不是引物设计时保护碱基选不的合适，是不是切不开啊，酶切位点分别是NDE1和XHO1
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1楼 2014-06-11 21:44:52
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by hero352 at 2014-06-12 21:36:35
我是高保真酶PCR，不能直接连T载体，如果PCR产物加A的话，不知道效率高不高...

你这两种选择效率都不高

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7楼2014-06-12 22:03:49
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-11 23:36:39
你可以把片段连在t载体上，再切下来，不必加保护碱基

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-11 22:17:42
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 我们一般是3个，没发现有太大的什么问题 2014-06-11 23:38:30
XhoI加3个保护碱基切20h效率约为75%，我一般都是加6个保护碱基。而且XhoI4个位点的连接效率低于其他位点，一般都是要长时间连接的。
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大家相互帮助哈
3楼2014-06-11 22:59:36
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匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2014-06-12 09:55:25
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