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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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周兵lofter

新虫 (小有名气)

[求助] 胶回收 连接 已有4人参与

胶回收的产物是不纯的 有4000和2000. 但我想进行连接转化,之后挑菌,做菌液pcr,但跑胶后出现的都是2000的。4000的没连进去。请问的是能不能延长连接反应时间解决这个问题。
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周兵lofter

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-05 20:53:08
既然2k和4k
你为什么不跑的长点,然后单独切出来4k啊?
延长连接时间,是可以让链接效率提高
但是问题是,4k的提高比起2k的提高,可以忽略不计
另外,在生长过程中,4k的会很快被2k的给掩盖过去
最后你只能挑出 ...

亲  我也是这么想的 胶回收胶回收。也分的很开  然后切。。。但还是有2000的条带。。然后我接着在做胶回收,最后一次只能隐约的看到上面那条了。。。但连接转化后,没有长出菌落。。。  但是最后这次我是不能确定有没有2000了,因为4000的条带也很微弱了。。。
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3楼2014-06-06 11:07:38
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-06 12:36:29
既然2k和4k
你为什么不跑的长点,然后单独切出来4k啊?
延长连接时间,是可以让链接效率提高
但是问题是,4k的提高比起2k的提高,可以忽略不计
另外,在生长过程中,4k的会很快被2k的给掩盖过去
最后你只能挑出2k的片段,4k的可能只有不到百分之一,那工作量啊,太大了

强烈建议你重新切胶,我们相隔200bp的都可以切开
天行健
2楼2014-06-06 10:53:08
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grase

捐助贵宾 (职业作家)


【答案】应助回帖

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★ ★
感谢参与,应助指数 +1
周兵lofter(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-06 12:36:50
引用回帖:
3楼: Originally posted by 周兵lofter at 2014-06-06 11:07:38
亲  我也是这么想的 胶回收胶回收。也分的很开  然后切。。。但还是有2000的条带。。然后我接着在做胶回收,最后一次只能隐约的看到上面那条了。。。但连接转化后,没有长出菌落。。。  但是最后这次我是不能确定有 ...

4000的再扩增点吧。可以过夜连,连时间长点。
如果量少,阳性克隆也少。
4楼2014-06-06 11:14:08
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
周兵lofter(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:18:20
将胶回收的产物再次进行PCR,电泳切出特异条带,然后胶回收。。。。。。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
5楼2014-06-06 13:37:58
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