24小时热门版块排行榜    

查看: 3808  |  回复: 29
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   同方向广播   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
7楼2014-05-12 20:58:58
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 30 个回答

for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-12 15:04:32
louis_cheung: 金币+3, 有帮助 2014-05-12 20:52:44
多长时间菌长到可见?
一般来说的话是空质粒转进去了。也就是质粒酶切不干净,t载体就是质粒自连。重新双酶切或者逐个单酶切。重新连接转化

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
操蛋的XX
2楼2014-05-12 14:46:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
louis_cheung: 金币+3, 有帮助 2014-05-12 20:57:47
“自己将kozak序列、信号肽(后加了一个酶切位点)连到空载体中构建成带有信号肽的载体,但是此时对载体进行双酶切时酶切效率很低,总有许多切不开”
这里你具体用的是什么限制性内切酶呢?你在信号肽后面加的一个酶切位点,具体是什么位点呢?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-05-12 15:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
louis_cheung: 金币+8, 有帮助 2014-05-12 20:59:35
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-05-31 16:30:50
LZ的实验是先将kozak序列、信号肽序列PCR出来,酶切酶连到空载上,然后PCR基因,再酶切酶连到有kozak序列、信号肽序列的载体上。出现的问题是构建好的kozak序列、信号肽序列的载体切不开,与基因连不上,还有与基因连接后筛选平板上的转化子是假阳性,甚至没有转化子吗?还是说你筛选平板上长的有菌,但是菌连空载质粒也没有?
    问题首先可能出在你构建载体的酶切位点上,切割效率不高后期自然连接效果就很差,你添加的酶切位点是哪个位点?你的另一个位点是不是与你这个位点间隔很近?你的切割位点是不是收到甲基化影响?LZ可以双切载体不加基因做一次转化看看筛选平板上是不是长很多转化子,如果很多转化子的话那酶切就有问题。
    如果是菌连质粒都没有的话,那可能是你转化过程中染菌了,或者筛选平板抗生素失效了。
大家相互帮助哈
4楼2014-05-12 15:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见