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1楼2014-05-04 17:29:12

猪尾巴草

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576142326(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-04 19:49:52
576142326: 金币+1 2014-05-08 17:24:22

你是怎么知道甘油菌出现质粒丢失的？可以重新对甘油菌进行划线后挑单菌落，能生长的含有质粒，你再抽提质粒看看，然后保菌

2楼2014-05-04 17:37:10

hytcher

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576142326: 金币+1 2014-05-08 17:25:31

是否是提取质粒得量严重下降？或者提取不到？
如果是前者，可以通过划平板重新获得含质粒的单克隆。但也要注意是否是容易出现质粒容易丢失的情况。那样建议重新转。
如果是后者，在抗性没有问题的情况下，还是重新转比较好。很可能是被其他杂菌污染了。

3楼2014-05-04 22:49:03

576142326

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-05-04 17:37:10
你是怎么知道甘油菌出现质粒丢失的？可以重新对甘油菌进行划线后挑单菌落，能生长的含有质粒，你再抽提质粒看看，然后保菌

我的甘油菌接菌不长，然后我就发现质粒丢失了，现在我划线后重新挑单菌落已经没问题了，但是担心重新划线的菌的质粒拷贝数会降低

4楼2014-05-05 12:48:14

wlt728

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【答案】应助回帖

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如果说涂在抗性平板，长得单菌落很少或者不长，可能是质粒丢失（前体是稀释倍数不要太多），如果你想获得高表达的甘油菌，建议还是重新提质粒进行转化。如果刚构建好的菌种就出现这种现象，也可能说明你的质粒就不稳定，很容易丢失！应该换宿主菌试试！

I am not a hero , but I served with heroes！

5楼2014-05-05 19:51:34

576142326

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5楼: Originally posted by wlt728 at 2014-05-05 19:51:34
如果说涂在抗性平板，长得单菌落很少或者不长，可能是质粒丢失（前体是稀释倍数不要太多），如果你想获得高表达的甘油菌，建议还是重新提质粒进行转化。如果刚构建好的菌种就出现这种现象，也可能说明你的质粒就不稳 ...

我想问一下是不是只要BL菌中有这个质粒，那么在BL菌的不同单菌落中，它就会以相同的拷贝数存在，谢谢啦！

6楼2014-05-08 17:28:40