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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 甘油菌出现质粒丢失现象后，通过重新对甘油菌进行划线后挑单菌落可以吗
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576142326

木虫 (正式写手)

[求助] 甘油菌出现质粒丢失现象后，通过重新对甘油菌进行划线后挑单菌落可以吗 已有4人参与

如题
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1楼 2014-05-04 17:29:12
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
576142326(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-04 19:49:52
576142326: 金币+1 2014-05-08 17:24:22
你是怎么知道甘油菌出现质粒丢失的？可以重新对甘油菌进行划线后挑单菌落，能生长的含有质粒，你再抽提质粒看看，然后保菌
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2楼2014-05-04 17:37:10
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hytcher

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
576142326: 金币+1 2014-05-08 17:25:31
是否是提取质粒得量严重下降？或者提取不到？
如果是前者，可以通过划平板重新获得含质粒的单克隆。但也要注意是否是容易出现质粒容易丢失的情况。那样建议重新转。
如果是后者，在抗性没有问题的情况下，还是重新转比较好。很可能是被其他杂菌污染了。
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3楼2014-05-04 22:49:03
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576142326

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-05-04 17:37:10
你是怎么知道甘油菌出现质粒丢失的？可以重新对甘油菌进行划线后挑单菌落，能生长的含有质粒，你再抽提质粒看看，然后保菌

我的甘油菌接菌不长，然后我就发现质粒丢失了，现在我划线后重新挑单菌落已经没问题了，但是担心重新划线的菌的质粒拷贝数会降低
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4楼2014-05-05 12:48:14
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果说涂在抗性平板，长得单菌落很少或者不长，可能是质粒丢失（前体是稀释倍数不要太多），如果你想获得高表达的甘油菌，建议还是重新提质粒进行转化。如果刚构建好的菌种就出现这种现象，也可能说明你的质粒就不稳定，很容易丢失！应该换宿主菌试试！
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I am not a hero , but I served with heroes！
5楼2014-05-05 19:51:34
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576142326

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wlt728 at 2014-05-05 19:51:34
如果说涂在抗性平板，长得单菌落很少或者不长，可能是质粒丢失（前体是稀释倍数不要太多），如果你想获得高表达的甘油菌，建议还是重新提质粒进行转化。如果刚构建好的菌种就出现这种现象，也可能说明你的质粒就不稳 ...

我想问一下是不是只要BL菌中有这个质粒，那么在BL菌的不同单菌落中，它就会以相同的拷贝数存在，谢谢啦！
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6楼2014-05-08 17:28:40
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hytcher

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 576142326 at 2014-05-08 17:28:40
我想问一下是不是只要BL菌中有这个质粒，那么在BL菌的不同单菌落中，它就会以相同的拷贝数存在，谢谢啦！...

不是的。即使是同一个单克隆中的菌都不可能。
所以划平板时，不能让菌长的时间太久（克隆太大）。
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7楼2014-05-09 06:29:52
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

出现质粒丢失，我最近也出现这样，最好还是从新转化，保险靠谱一点，保菌的甘油浓度最好试着摸索下，我今天刚来验证，出现结果有空回来回个帖，目前楼主还是从新转化然后同时将菌株进行涂板，有抗性的板
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
8楼2014-05-09 11:03:29
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