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求助，PCR总是P不出条带！！求大神 已有1人参与
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背景-------我是做的野生动物微卫星遗传多样性研究，提取的DNA是从粪便用试剂盒提取的，琼脂糖电泳条带都在2000kb以上，且大部分比较亮。引物是从外文文献上拿来直接用的。Taq酶，buffer这些也都是新买的，试剂上面应该没什么问题。 PCR体系用12.5微升体系： buffer：1.25 dNTP：1.25 taq酶：0.1 F：1 R：1 DNA：1.5 dd水：6.4 问题来了，用引物1在这个体系下，用八个DNA来分别作温度梯度PCR，只有一个DNA能P出来条带，且在三个温度下都有条带，然后用另一个在这个体系下没出条带的DNA，只是把DNA模板量调到0.5微升，其他不变，结果就能P出来，这就是不是说明DNA模板量浓度不同，每个DNA都要对应一个需加入的模板量么？？也就是说每个DNA都要对应一个体系么？？？？ 那么，我的DNA有将近二百个样，每个DNA都要摸索一下要加的模板量的话，还能毕业么？怎么办啊？？老师让我测一下DNA浓度，大概0.15微克每微升，用同一个DNA测两次的时候，两次读数相差不小，是仪器的问题还是没混匀啊？应该怎么混匀呢，我都是吹打五十次左右的。怎么办？求大神指点啊。。。。 |
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