24小时热门版块排行榜    

查看: 788  |  回复: 4

ashleyoo00

新虫 (初入文坛)

[求助] 全长cDNA PCR问题 已有1人参与

最近做了RT,然后做全长cDNA的PCR,但是一直P不出东西来,跑胶只能看到引物二聚化的条带。
PCR有做了内参基因,能够P出来。
请问这是什么原因呢??

我P的是FBXO32,引物(加了酶切位点和保护碱基)如下:
FP:  ATA GCGGCCGC A ATGCCATTCCTCGGGCAGGA      67℃
RP:  GGCGCGCC C GCAGAACTTGAACAAGTTGATAAAGTCC   63℃
Tm值是不计算酶切位点和保护碱基序列的值。

求大神指点!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-27 11:21:01
ashleyoo00: 金币+2, 有帮助 2014-04-28 19:40:08
你这算法不大对啊,再说了,你两条引物也差得太多了,难p是很正常的

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-26 22:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ashleyoo00

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-26 22:42:15
你这算法不大对啊,再说了,你两条引物也差得太多了,难p是很正常的

用Primer Premier 5设计引物软件自己计算的Tm值呀,然后这段CDS两端的GC含量本身相差也较大,为了保证两条引物的退火温度比较接近,所以它们的长度也就相差比较大了。这个有什么解决办法吗??引物的设计我也不是很懂,求救><
3楼2014-04-26 22:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-27 11:21:07
引用回帖:
3楼: Originally posted by ashleyoo00 at 2014-04-26 22:49:25
用Primer Premier 5设计引物软件自己计算的Tm值呀,然后这段CDS两端的GC含量本身相差也较大,为了保证两条引物的退火温度比较接近,所以它们的长度也就相差比较大了。这个有什么解决办法吗??引物的设计我也不是很 ...

那个软件很过时了,建议用primer-blast

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-27 08:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ashleyoo00

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-27 08:49:03
那个软件很过时了,建议用primer-blast
...

用NCBI上的primer-blast吗?那样跟用这个软件有区别么?还有就是这段序列本身前后端的GC含量相差比较大啊。。
5楼2014-04-27 10:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ashleyoo00 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +6 tcxiaoxx 2026-03-20 6/300 2026-03-22 20:23 by edmund7
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +6 生物工程调剂 2026-03-17 10/500 2026-03-22 20:22 by edmund7
[考研] 298求调剂 +6 上岸6666@ 2026-03-20 6/300 2026-03-22 20:21 by edmund7
[考研] 招08考数学 +4 laoshidan 2026-03-20 8/400 2026-03-22 19:56 by 小皮蛋酱
[考研] 284求调剂 +5 Zhao anqi 2026-03-22 5/250 2026-03-22 17:38 by barlinike
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸! 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +7 困于星晨 2026-03-17 9/450 2026-03-20 17:38 by 无懈可击111
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
信息提示
请填处理意见