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意萧02

木虫 (正式写手)

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[求助] pcr出现类似弥散问题怎么回事，帮我分析分析原因，谢谢已有1人参与

大家好，刚做pcr和电泳，老是出现问题，请大家帮我分析分析，谢谢。
我的实验设计是这样的：
亲本DNA浓度：130ug/UL，基因池：50ug/ul.
PCR体系设置：（10ul体系）
ddH2O：3.2ul
混合酶： 5ul
引物：1ul
DNA： 0.8ul。
PCR时间设置：
94度：5min
94度：45s
55度：45s
72度：90s
72度：7min
4度：无穷
94-72度循环35次。
说明：图像4个为一组。前面marker。4个的顺序分别为亲本1，亲本2，基因池1，基因池2.
我做的是水稻的QTL定位。求大家帮忙。谢谢了。
图片1是聚丙烯酰胺凝胶电泳，图片2是琼脂糖凝胶电泳。

2.jpg

1.jpg

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【求助/交流】PCR以前能出来目的条带，现在一直弥散，诸位帮忙分析一下已经有4人回复

1楼 2014-05-04 15:57:21

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1057910381

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
意萧02(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-04 17:03:46
意萧02: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢，虽然没解决，还是很感谢你，我还在摸索中 2014-05-12 10:37:01

做mapping的时候出现很多条带应该是正常现象吧，而且是基因组DNA，可是适当提高退火温度，这样非特异性扩增应该会少一些的

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