应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 最近做pcr,内参出来了，目的片段却一直出不来，只有引物二聚体
51/1返回列表
查看: 2923  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dingcong1216

新虫 (小有名气)

[求助] 最近做pcr,内参出来了，目的片段却一直出不来，只有引物二聚体 已有7人参与

最近做pcr,内参出来了，目的片段却一直出不来，只有引物二聚体。
其中很亮的三个是内参，从右到左依此是四个不同引物，跑了三个平行，可是全都是引物二聚体。
反应程序：94℃  5min
                 94℃   50s
                 52℃   1min      
                 72℃   1.5min     35cycles
                 72℃   10min
                  8℃   
    目的片段长度： 右一：678bp, 右二：1261bp，右三：1514bp，右四：425bp.
   PS:引物是老师帮忙设计的，应该没什么问题，可就是跑不出来。老师也帮忙优化了一次体系，还是没出来。
还有模板用内参跑出来很亮，有没有可能是模板的问题？
  求各位大侠给个建议。

最近做pcr,内参出来了，目的片段却一直出不来，只有引物二聚体
dell 2014-04-30 15 时 46 分.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-30 16:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingcong1216

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-01 08:11:23
DNA 模板应该没有问题，你的control可以P出来
那就是你引物设计的问题了吧，还有，你的退火条件，是按照你设计引物的退火温度，还是就是设定在52呢？

如果不行，可以尝试touch down，或者，在反应体系中加3%的D ...

嗯，退火温度我用的梯度的都没有出来，老师帮我看了一下，说52差不多可以了。还有我之前想过用touch down，可是我们的是的effdorf的普通的PCR仪，不知道你能不能设定touch down的程序。
赞一下 回复此楼
10楼2014-05-04 10:07:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:36
引物设计有没有问题？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-30 18:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
胶放反了！！！引物可能需要重新设计了
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-04-30 20:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:50
DNA 模板应该没有问题，你的control可以P出来
那就是你引物设计的问题了吧，还有，你的退火条件，是按照你设计引物的退火温度，还是就是设定在52呢？

如果不行，可以尝试touch down，或者，在反应体系中加3%的DMSO看看。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-01 08:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭