24小时热门版块排行榜    

查看: 2515  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dingcong1216

新虫 (小有名气)

[求助] 最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体 已有7人参与

最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体。
其中很亮的三个是内参,从右到左依此是四个不同引物,跑了三个平行,可是全都是引物二聚体。
反应程序:94℃  5min
                 94℃   50s
                 52℃   1min      
                 72℃   1.5min     35cycles
                 72℃   10min
                  8℃   
    目的片段长度: 右一:678bp, 右二:1261bp,右三:1514bp,右四:425bp.
   PS:引物是老师帮忙设计的,应该没什么问题,可就是跑不出来。老师也帮忙优化了一次体系,还是没出来。
还有模板用内参跑出来很亮,有没有可能是模板的问题?
  求各位大侠给个建议。

最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体
dell 2014-04-30 15 时 46 分.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:50
DNA 模板应该没有问题,你的control可以P出来
那就是你引物设计的问题了吧,还有,你的退火条件,是按照你设计引物的退火温度,还是就是设定在52呢?

如果不行,可以尝试touch down,或者,在反应体系中加3%的DMSO看看。
4楼2014-05-01 08:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:36
引物设计有没有问题?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-30 18:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

胶放反了!!!引物可能需要重新设计了
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
3楼2014-04-30 20:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:58
你如何确认你要测的基因表达?

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-05-01 16:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 一志愿天大材料与化工(085600)总分338 +4 蔡大美女 2026-03-13 4/200 2026-03-18 22:47 by walc
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见