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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：pcr 10微升体系跑出条带很亮，50微升体系跑不出东西
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守护13的爱恋

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：pcr 10微升体系跑出条带很亮，50微升体系跑不出东西已有4人参与

我用兼并引物跑的pcr，有条带但不亮，我就用pcr产物作为模板跑了个10微升的巢式pcr，条带很亮。想做胶回收，就用同样的方法跑了50微升体系的，结果什么东西都没有，急死人了，求高人指点
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1楼2014-04-23 10:19:35
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-24 11:50:18
试剂的比例对不对？PCR仪设置的样品体积是否与实际体积匹配？
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4楼2014-04-24 11:02:49
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-24 11:50:03
10微升的多做几个不行了？你要是按比例扩大的应该跑出来的，成分一定要混匀。
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学习使你立于不败之地
2楼2014-04-23 14:32:23
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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-24 11:50:11
混匀是重点，量大了如果还不匀结果通常都不好。
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3楼2014-04-24 10:55:28
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1009238055

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议楼主还是每次都是用同样的体系扩增吧，不容易出错，大不了多扩几管，回收到一起就OK啦。很方便的，要不然体系一变就各种改条件，很麻烦的。这种情况要是单独加样估计是加样的时候枪的误差造成各试剂终浓度变了，要是加号样分装可能就像楼上说的没有混匀啦。
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5楼2015-01-16 20:50:30
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