| 查看: 4977 | 回复: 24 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
目的片段和载体连接一直不上 已有7人参与
|
||
|
1、目的片段738bp（两端带酶切位点）,载体选择pCAMBIA3301,酶切位点选择Nco I和BstE II。载体确定已经双酶切开来，目的片段应该也双酶切成功（电泳图片看不出来）。用的Promega的T4连接酶，载体和目的片段摩尔比1:5，反应体系20ul，22℃连接3.5小时，转化至DH5α，未出现菌落。 2、也有说将目的片段和T载体先连接，然后再和表达载体连接，这样更容易连上。原理是什么，不懂。 感谢您的帮助。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有117人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【酶连】三片段连接总是做不出来，求助！
已经有7人回复
- 载体与片段连不上
已经有13人回复
- 目的基因与载体连接问题
已经有8人回复
- T载体连接不上去
已经有26人回复
- 片段总是连不到T载体上
已经有22人回复
- DNA片段连接到载体上都有什么方法
已经有6人回复
- 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
已经有16人回复
- 确定连接时载体，片段的加入量
已经有4人回复
- 全式金的pEASY-EI载体和目的基因连不上
已经有10人回复
- PCR片段与载体连接不上
已经有6人回复
- 长片段连接问题
已经有12人回复
- 目的片段与载体连接后无法检测出
已经有7人回复
- 关于连接转化载体和片段的问题
已经有6人回复
- PMD19-T载体连接不上428bp的片段
已经有20人回复
- 载体总是连不上，已经一个月了~真心求助，详细在帖子里
已经有7人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- 目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……
已经有7人回复
- 长片段DNA如何连接载体
已经有21人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
已经有26人回复
- 【求助/交流】目的片段与载体连接不上
已经有16人回复
随风飘摇11
木虫 (著名写手)
- 应助: 92 (初中生)
- 金币: 2284.9
- 散金: 606
- 红花: 53
- 帖子: 2249
- 在线: 818.5小时
- 虫号: 1146270
- 注册: 2010-11-14
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2014-04-12 23:46:09
for5
木虫 (正式写手)
- 应助: 127 (高中生)
- 金币: 3356.6
- 红花: 10
- 帖子: 880
- 在线: 283.6小时
- 虫号: 696070
- 注册: 2009-02-04
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2014-04-12 20:57:42
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2014-04-12 22:46:37
淘淘279
铜虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 934.8
- 帖子: 64
- 在线: 16.4小时
- 虫号: 2670382
- 注册: 2013-09-22
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2014-04-12 23:06:33
