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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

[求助] 大家来看一下我做的酶切电泳图,看不明白 已有1人参与

我的电泳图,2泳道是没有酶切的质粒对照,3,4泳道为我的双酶切,有两条带,请问哪个才是我切出来的目的片段?载体酶切位点是画圈的XhoI,NcoI,两者相距80多bp,是不是有一条带是没酶切完全的? Marker是1万的marker
我的酶切体系(50微升,takara酶):快切酶buffer:5微升,XhoI 2微升,NcoI 2微升,载体20微升,ddH2O 21 微升,载体浓度为370纳克/微升。




大家来看一下我做的酶切电泳图,看不明白
双酶切图.jpg
大家来看一下我做的酶切电泳图,看不明白-1
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lpzl

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
下面一条是目的片段吧。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-03-27 11:10:05
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-03-27 11:10:05
下面一条是目的片段吧。。。

如果是下边的,线性的不是比没酶切完的跑的慢吗,酶切开的是不是应该比对照更靠上啊?
3楼2014-03-27 11:16:56
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

酶切了多长时间?按照道理,如果酶切完全,应该只有一条带。
4楼2014-03-27 12:12:38
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by njuzhangxin at 2014-03-27 12:12:38
酶切了多长时间?按照道理,如果酶切完全,应该只有一条带。

我用的takara的快速内切酶,37度反应了大概2个小时
5楼2014-03-27 12:17:22
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-03-27 12:17:22
我用的takara的快速内切酶,37度反应了大概2个小时...

电泳是不是出问题了
6楼2014-03-27 14:31:58
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-03-27 12:17:22
我用的takara的快速内切酶,37度反应了大概2个小时...

建议延长时间,也可以过夜酶切试试。
7楼2014-03-27 16:57:49
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-03-27 14:31:58
电泳是不是出问题了...

看电泳图,电泳正常,应该没问题
8楼2014-03-27 16:58:21
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