| 查看: 2573 | 回复: 9 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
windleakey金虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR产物连T载体转化后，阳性率低 已有3人参与
|
|
|
RT，最近实验发现，PCR产物经纯化后连T载体，转化后阳性率总是很低，挑10个单克隆做PCR可能只有一个是阳性的，虽然能得到想要的，但还是觉得很奇怪，不知道是什么原因。 请问有大神知道吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有188人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 胶回收产物连入克隆载体进行转化，结果第二天没有菌落长出。怎么回事儿？
已经有5人回复
- 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
已经有16人回复
- 10kb的pcr产物能连到T载体上吗
已经有17人回复
- pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接
已经有16人回复
- 求助：Xho 1 单酶切 载体连接
已经有19人回复
- 急!要连表达载体的目的片段可以是PCR后回收的产物吗？已经连中间载体验证过了
已经有3人回复
- 连接转化出现很多微小的菌落
已经有14人回复
- 大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点
已经有55人回复
- pfu扩增，菌液PCR问题
已经有4人回复
- 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上
已经有26人回复
- PCR阳性检测结果，空载体和水都能扩的出来，怎么回事呢？
已经有4人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- PCR产物与T载体连不上 求助
已经有29人回复
- 【求助/交流】连到pGEM-T载体上的PCR回收产物，提质粒后还需要做酶切验证吗？
已经有13人回复
- 【求助/交流】pGEM-T Easy载体 T-A 连接 为啥没连入PCR产物的 菌斑是蓝斑
已经有23人回复
- 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
已经有26人回复
- 【求助/交流】PCR电泳结果疑问
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
Lau_Kimura
铁虫 (正式写手)
- 应助: 41 (小学生)
- 金币: 20.5
- 散金: 189
- 红花: 19
- 帖子: 320
- 在线: 119.1小时
- 虫号: 2468570
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
2楼2014-03-22 23:27:47
wangguosing
金虫 (正式写手)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 944.7
- 散金: 116
- 帖子: 644
- 在线: 31.4小时
- 虫号: 2708078
- 注册: 2013-10-09
- 专业: 微生物资源与分类学
3楼2014-03-23 09:22:24
西门吹雪170
荣誉版主 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 92 (初中生)
- 贵宾: 0.982
- 金币: 27278.4
- 散金: 1072
- 红花: 40
- 沙发: 2
- 帖子: 3092
- 在线: 438.7小时
- 虫号: 1209807
- 注册: 2011-02-22
- 性别: MM
- 专业: 认知科学
- 管辖: 分子生物
4楼2014-03-23 10:05:02
windleakey
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1071.9
- 红花: 1
- 帖子: 94
- 在线: 92.5小时
- 虫号: 1894719
- 注册: 2012-07-16
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
5楼2014-03-23 14:29:31
windleakey
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1071.9
- 红花: 1
- 帖子: 94
- 在线: 92.5小时
- 虫号: 1894719
- 注册: 2012-07-16
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
6楼2014-03-23 14:31:51
windleakey
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1071.9
- 红花: 1
- 帖子: 94
- 在线: 92.5小时
- 虫号: 1894719
- 注册: 2012-07-16
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
7楼2014-03-23 14:33:03
西门吹雪170
荣誉版主 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 92 (初中生)
- 贵宾: 0.982
- 金币: 27278.4
- 散金: 1072
- 红花: 40
- 沙发: 2
- 帖子: 3092
- 在线: 438.7小时
- 虫号: 1209807
- 注册: 2011-02-22
- 性别: MM
- 专业: 认知科学
- 管辖: 分子生物
8楼2014-03-23 17:11:47
tu475575025
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 416.1
- 红花: 2
- 帖子: 70
- 在线: 41小时
- 虫号: 2003636
- 注册: 2012-09-15
- 专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windleakey: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-03-24 12:32:05
gyesang: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:58:23
感谢参与，应助指数 +1
windleakey: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-03-24 12:32:05
gyesang: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:58:23
|
没有遇到过这种情况，连T载体效率相当高，经常会做，每次随便挑一个白斑就是阳性，后来索性不用怎么验证了。你可以从以下方面一个个排查： 1、感受态和转化方法，用完整的质粒转化试试，如果转化效率很高，说明这部分没有问题。 2、确认你做pcr的酶是不是会加A，如果是的，再查下一项。 3、用T载自带的control insert 连接T截试试，如果出现效率很低，可能就是你的T截或者solution I 出问题了。 4、再要排查就要换新的T载和solution I试试了 ps：你说每次要挑10来个转化子才有一个阳性，转化子很多嘛，说明你的转化效率还是很高，只是很多是载体自连而已，这个可以用蓝白斑来排除呀。猜测是你连接时T载用量过多，插入片段量少了（如果T载正常全部是线性）。也可能是你的载体出问题了，连接前就有很多已经环化了（可以直接转1ul 没有连接的T载试试）。 |
9楼2014-03-23 21:32:29
windleakey
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1071.9
- 红花: 1
- 帖子: 94
- 在线: 92.5小时
- 虫号: 1894719
- 注册: 2012-07-16
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
10楼2014-03-24 12:32:41
