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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PCR产物连T载体转化后，阳性率低
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windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] PCR产物连T载体转化后，阳性率低 已有3人参与

RT，最近实验发现，PCR产物经纯化后连T载体，转化后阳性率总是很低，挑10个单克隆做PCR可能只有一个是阳性的，虽然能得到想要的，但还是觉得很奇怪，不知道是什么原因。
请问有大神知道吗？
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1楼 2014-03-22 22:50:19
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windleakey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by tu475575025 at 2014-03-23 21:32:29
没有遇到过这种情况，连T载体效率相当高，经常会做，每次随便挑一个白斑就是阳性，后来索性不用怎么验证了。你可以从以下方面一个个排查：
1、感受态和转化方法，用完整的质粒转化试试，如果转化效率很高，说明这部 ...

谢谢建议，太认真了，打了这么多字，我会一一排查，再试试
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10楼2014-03-24 12:32:41
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
蓝白斑筛选了没？
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2楼2014-03-22 23:27:47
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wangguosing

金虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 没有帮助楼主解答问题，不能获得应助指数 2014-03-23 10:03:37
我也是，咋办，我的是氨氧化古菌的，怎么办
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3楼2014-03-23 09:22:24
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:57:53
转化效率很低，可以换种转化效率高的感受态细胞试试；也有肯能连接效率太低，建议变化一下体系的量，延长连接时间
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-03-23 10:05:02
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