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tu475575025

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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windleakey: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-03-24 12:32:05
gyesang: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 19:58:23
没有遇到过这种情况,连T载体效率相当高,经常会做,每次随便挑一个白斑就是阳性,后来索性不用怎么验证了。你可以从以下方面一个个排查:
1、感受态和转化方法,用完整的质粒转化试试,如果转化效率很高,说明这部分没有问题。
2、确认你做pcr的酶是不是会加A,如果是的,再查下一项。
3、用T载自带的control insert 连接T截试试,如果出现效率很低,可能就是你的T截或者solution I 出问题了。
4、再要排查就要换新的T载和solution I试试了
ps:你说每次要挑10来个转化子才有一个阳性,转化子很多嘛,说明你的转化效率还是很高,只是很多是载体自连而已,这个可以用蓝白斑来排除呀。猜测是你连接时T载用量过多,插入片段量少了(如果T载正常全部是线性)。也可能是你的载体出问题了,连接前就有很多已经环化了(可以直接转1ul 没有连接的T载试试)。
9楼2014-03-23 21:32:29
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