| 查看: 4490 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
笑笑打dota金虫 (小有名气)
|
[求助]
菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？ 已有3人参与
|
|
| 菌落PCR有目的条带，重组质粒PCR却没条带，然后提取质粒跑电泳，也没观察到重组之后大小的目的条带，有很多杂带，请问可能是什么原因啊？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有183人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒提取，结果出现四条、五条带，请大神指教！
已经有25人回复
- pcr目的条带出现杂带，是什么原因？
已经有11人回复
- 用的pCDNA-5重组质粒，通过测序检验质粒+目的基因是否构建成功
已经有5人回复
- 大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带
已经有12人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- 构建载体后，菌液PCR，没有目的条带！！！
已经有10人回复
- PCR产物再次PCR无条带 只有弥散
已经有18人回复
- 质粒ＰＣＲ扩不出目的条带，且有杂带，但是直接测序有结果？为什么？？？？？
已经有7人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- 转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~
已经有14人回复
- 菌液PCR出现杂带是什么原因？
已经有17人回复
- 菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？
已经有16人回复
- 质粒PCR大小正确，可是双酶切切不开
已经有8人回复
- PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？
已经有9人回复
- PCR一直扩不出目的条带
已经有10人回复
- PCR是阳性但酶切是阴性，怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】酶切后无任何条带是什么原因？
已经有8人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
tu475575025
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 416.1
- 红花: 2
- 帖子: 70
- 在线: 41小时
- 虫号: 2003636
- 注册: 2012-09-15
- 专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
笑笑打dota(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:01:16
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 20:01:18
笑笑打dota(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:01:16
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 20:01:18
|
直接在平板上挑菌落是可能沾到平板上你转化时用的DNA，所以你p出来可能全是阳性。你一定要用菌体做pcr建议先挑出来在1.5ml ep管里少量（500ul左右）培养一点，再用菌体做pcr，或者直接做菌液pcr。另外，如果你的插入片段够大（1k以上）的话，你可以直接跑菌液电泳，以空质粒（不要用线性的哟）作对比，如果是阳性转化子，质粒会滞后（重组质粒比空质粒大）。 菌液电泳：裂解液为2%SDS和0.4M NaoH1：1混合 裂解液10ul+菌液20ul 裂解2-5min后加入2ul溴酚蓝，全部点孔（制大孔的胶，不要放在缓冲液中点），观察质粒滞后的转化子一般就是你的阳性。 |
笑笑打dota8楼2014-03-23 21:13:23
1057910381
金虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4460.9
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 423
- 在线: 197.4小时
- 虫号: 1261400
- 注册: 2011-04-10
- 专业: 植物生理与生化
2楼2014-03-20 18:20:54
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
3楼2014-03-20 19:34:01
笑笑打dota
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1135.5
- 帖子: 51
- 在线: 297.8小时
- 虫号: 2852767
- 注册: 2013-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2014-03-21 09:11:44
