| 查看: 4875 | 回复: 13 | |||
笑笑打dota金虫 (小有名气)
|
[求助]
菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？ 已有3人参与
|
||
| 菌落PCR有目的条带，重组质粒PCR却没条带，然后提取质粒跑电泳，也没观察到重组之后大小的目的条带，有很多杂带，请问可能是什么原因啊？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有96人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒提取，结果出现四条、五条带，请大神指教！
已经有25人回复
- pcr目的条带出现杂带，是什么原因？
已经有11人回复
- 用的pCDNA-5重组质粒，通过测序检验质粒+目的基因是否构建成功
已经有5人回复
- 大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带
已经有12人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- 构建载体后，菌液PCR，没有目的条带！！！
已经有10人回复
- PCR产物再次PCR无条带 只有弥散
已经有18人回复
- 质粒ＰＣＲ扩不出目的条带，且有杂带，但是直接测序有结果？为什么？？？？？
已经有7人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- 转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~
已经有14人回复
- 菌液PCR出现杂带是什么原因？
已经有17人回复
- 菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？
已经有16人回复
- 质粒PCR大小正确，可是双酶切切不开
已经有8人回复
- PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？
已经有9人回复
- PCR一直扩不出目的条带
已经有10人回复
- PCR是阳性但酶切是阴性，怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】酶切后无任何条带是什么原因？
已经有8人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
1057910381
金虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4460.9
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 423
- 在线: 197.4小时
- 虫号: 1261400
- 注册: 2011-04-10
- 专业: 植物生理与生化
2楼2014-03-20 18:20:54
tu475575025
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 416.1
- 红花: 2
- 帖子: 70
- 在线: 41小时
- 虫号: 2003636
- 注册: 2012-09-15
- 专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
笑笑打dota(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:01:16
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 20:01:18
笑笑打dota(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:01:16
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 20:01:18
|
直接在平板上挑菌落是可能沾到平板上你转化时用的DNA，所以你p出来可能全是阳性。你一定要用菌体做pcr建议先挑出来在1.5ml ep管里少量（500ul左右）培养一点，再用菌体做pcr，或者直接做菌液pcr。另外，如果你的插入片段够大（1k以上）的话，你可以直接跑菌液电泳，以空质粒（不要用线性的哟）作对比，如果是阳性转化子，质粒会滞后（重组质粒比空质粒大）。 菌液电泳：裂解液为2%SDS和0.4M NaoH1：1混合 裂解液10ul+菌液20ul 裂解2-5min后加入2ul溴酚蓝，全部点孔（制大孔的胶，不要放在缓冲液中点），观察质粒滞后的转化子一般就是你的阳性。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
笑笑打dota8楼2014-03-23 21:13:23
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
3楼2014-03-20 19:34:01
笑笑打dota
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1135.5
- 帖子: 51
- 在线: 297.8小时
- 虫号: 2852767
- 注册: 2013-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2014-03-21 09:11:44
笑笑打dota
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1135.5
- 帖子: 51
- 在线: 297.8小时
- 虫号: 2852767
- 注册: 2013-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2014-03-21 09:13:58
1057910381
金虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4460.9
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 423
- 在线: 197.4小时
- 虫号: 1261400
- 注册: 2011-04-10
- 专业: 植物生理与生化
6楼2014-03-21 12:45:15
  |
7楼2014-03-23 18:50:36
笑笑打dota
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1135.5
- 帖子: 51
- 在线: 297.8小时
- 虫号: 2852767
- 注册: 2013-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2014-03-24 10:15:47
beatrice1018
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3.5
- 红花: 1
- 帖子: 9
- 在线: 9.8小时
- 虫号: 2766700
- 注册: 2013-10-31
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
10楼2014-05-06 13:42:13
40