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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by beatrice1018 at 2014-05-06 13:42:13
楼主，我最近也出现了类似问题，不过我是做菌落PCR时有目的条带，比较亮，但是接菌摇瓶培养提质粒后用质粒跑电泳时只有一片拖尾式的区域，请问你明白么？

你是提取质粒直接电泳？直接电泳的话，质粒提的好的话，会有2-3条带的。对应质粒的3种不同形态。
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11楼2014-05-07 09:10:27
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三吉草

铜虫 (小有名气)
我最近也出现这样的问题，菌落扩出来都是阳性，而且条带单一，位置正确。菌液也能摇起来，可是扩不出来。按照楼上的分析，是因为连接产物中基因没有连上，沾到菌落上了么？基因浓度过高是不是不利于连接呢？因为我提过质粒后酶切验证也能切得开，就是没有目的条带。
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12楼2014-05-07 09:46:36
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 三吉草 at 2014-05-07 09:46:36
我最近也出现这样的问题，菌落扩出来都是阳性，而且条带单一，位置正确。菌液也能摇起来，可是扩不出来。按照楼上的分析，是因为连接产物中基因没有连上，沾到菌落上了么？基因浓度过高是不是不利于连接呢？因为我提 ...

他们的意思是菌落PCR不靠谱，污染比较大。我现在是菌落能PCR出来，提取质粒验证也能PCR出来，但是送去测序就不对。阴性对照也没有条带。搞不清楚是个什么状况。
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13楼2014-05-08 08:44:54
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beatrice1018

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 笑笑打dota at 2014-05-07 09:10:27
你是提取质粒直接电泳？直接电泳的话，质粒提的好的话，会有2-3条带的。对应质粒的3种不同形态。...

理论上应该是这样的，但是后来再做了几次，重组质粒的大小发生了变化，比空载体还小，不知道为什么
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14楼2014-05-14 14:38:30
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