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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by beatrice1018 at 2014-05-06 13:42:13
楼主,我最近也出现了类似问题,不过我是做菌落PCR时有目的条带,比较亮,但是接菌摇瓶培养提质粒后用质粒跑电泳时只有一片拖尾式的区域,请问你明白么?

你是提取质粒直接电泳?直接电泳的话,质粒提的好的话,会有2-3条带的。对应质粒的3种不同形态。
11楼2014-05-07 09:10:27
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三吉草

铜虫 (小有名气)

我最近也出现这样的问题,菌落扩出来都是阳性,而且条带单一,位置正确。菌液也能摇起来,可是扩不出来。按照楼上的分析,是因为连接产物中基因没有连上,沾到菌落上了么?基因浓度过高是不是不利于连接呢?因为我提过质粒后酶切验证也能切得开,就是没有目的条带。
12楼2014-05-07 09:46:36
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 三吉草 at 2014-05-07 09:46:36
我最近也出现这样的问题,菌落扩出来都是阳性,而且条带单一,位置正确。菌液也能摇起来,可是扩不出来。按照楼上的分析,是因为连接产物中基因没有连上,沾到菌落上了么?基因浓度过高是不是不利于连接呢?因为我提 ...

他们的意思是菌落PCR不靠谱,污染比较大。我现在是菌落能PCR出来,提取质粒验证也能PCR出来,但是送去测序就不对。阴性对照也没有条带。搞不清楚是个什么状况。
13楼2014-05-08 08:44:54
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beatrice1018

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 笑笑打dota at 2014-05-07 09:10:27
你是提取质粒直接电泳?直接电泳的话,质粒提的好的话,会有2-3条带的。对应质粒的3种不同形态。...

理论上应该是这样的,但是后来再做了几次,重组质粒的大小发生了变化,比空载体还小,不知道为什么
14楼2014-05-14 14:38:30
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