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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 16SrDNA测序问题
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shellyxss

金虫 (正式写手)

[求助] 16SrDNA测序问题 已有2人参与

细菌的16SrDNA用通用引物PCR出来后第二天就送样拿去测序，结果是测序失败，可能是什么原因呢？
PCR结束后做了电泳，结果显示在1500bp处有条带
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1楼 2014-03-17 09:39:15
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-17 10:24:56
shellyxss: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-17 14:31:21
1500要么walking测通，要么双向测通。
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2楼2014-03-17 09:42:20
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yipan at 2014-03-17 09:42:20
1500要么walking测通，要么双向测通。

我选择的是双向测通
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3楼2014-03-17 09:43:54
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yipan

铜虫 (职业作家)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-17 10:25:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by shellyxss at 2014-03-17 09:43:54
我选择的是双向测通...

16srDNA鉴定的话最好是连接到T载上面去测，PCR产物一般测不出来，做个蓝白斑看看。
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4楼2014-03-17 09:50:12
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yipan at 2014-03-17 09:50:12
16srDNA鉴定的话最好是连接到T载上面去测，PCR产物一般测不出来，做个蓝白斑看看。...

我就是想做个普通的菌种鉴定，有些测序成功，有些测序失败
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5楼2014-03-17 10:04:58
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yipan

铜虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shellyxss at 2014-03-17 10:04:58
我就是想做个普通的菌种鉴定，有些测序成功，有些测序失败...

是不是染菌了？污染的话有可能做不出的
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6楼2014-03-17 10:29:43
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晶晶梁

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shellyxss: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-17 14:31:29
重做就是了，再不行的话就做克隆吧，我也做了很多这个
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7楼2014-03-17 12:51:15
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yipan at 2014-03-17 10:29:43
是不是染菌了？污染的话有可能做不出的...

谢谢了
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8楼2014-03-17 14:30:46
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 晶晶梁 at 2014-03-17 12:51:15
重做就是了，再不行的话就做克隆吧，我也做了很多这个

已经重新做过了 还是这样
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9楼2014-03-17 14:31:05
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晶晶梁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shellyxss at 2014-03-17 14:31:05
已经重新做过了 还是这样...

那就做克隆吧，转入大肠杆菌拿菌液去测序，试试吧，我刚还做了一个
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10楼2014-03-18 10:54:55
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