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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒自连问题
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永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 质粒自连问题 已有2人参与

请问质粒自连后，电泳会出现什么情况？想要了解有关更多的质粒自连的资料，求解答，谢谢，谢谢~~
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1楼 2014-03-07 21:27:48
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-03-08 17:43:28
永远一片天: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-03-26 12:40:05
质粒自连
会出现的情况是，跑电泳时，你连接后的质粒比你之前未酶切的质粒都小

比如你载体5k，片段1k，按理说跑出来应该是新质粒》载体
但是结果你跑出来是载体》新质粒

避免质量自连的方法如下
1 尽量使用双酶切，单酶切容易造成自连
2 双酶切的选择要谨慎，参考相应资料，最好在同一buffer中，效率要一样，否则可能造成单酶切， 比如bamhi酶切效率100%，另一个noti酶切效率10%那么最终你就成了单酶切
3 双酶切时间要保障，一般过夜
4 如果非要单酶切，一定要去磷酸化
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天行健
3楼2014-03-07 23:38:11
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-08 17:42:43
永远一片天: 金币+2 2014-03-26 12:40:14
质粒自连跑胶会出现多条带。防止质粒自连最好是末端去一下磷酸化。
赞一下(1人) 回复此楼
hehe
2楼2014-03-07 21:31:14
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