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质粒自连问题 已有2人参与
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| 请问质粒自连后，电泳会出现什么情况？想要了解有关更多的质粒自连的资料，求解答，谢谢，谢谢~~ |
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lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
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2楼2014-03-07 21:31:14
youlinglyw
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质粒自连 会出现的情况是，跑电泳时，你连接后的质粒比你之前未酶切的质粒都小 比如你载体5k，片段1k，按理说跑出来应该是新质粒》载体 但是结果你跑出来是载体》新质粒 避免质量自连的方法如下 1 尽量使用双酶切，单酶切容易造成自连 2 双酶切的选择要谨慎，参考相应资料，最好在同一buffer中，效率要一样，否则可能造成单酶切， 比如bamhi酶切效率100%，另一个noti酶切效率10%那么最终你就成了单酶切 3 双酶切时间要保障，一般过夜 4 如果非要单酶切，一定要去磷酸化 |
3楼2014-03-07 23:38:11