| 查看: 5106 | 回复: 10 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
PET28a重组质粒酶切后有三条？ 已有3人参与
|
||||
|
酶切体系： 质粒 6 μl 10*Buufer 1 μl bamH1 0.5 μl sal1 0.5 μl ddH2O 2 μl 37℃酶切1.5h 酶切结果如图片 条带顺序： 右边开始依次为：marker 酶切前、酶切后，依次类推共28 个样。此后两个样为空载酶切前，空载酶切后。 问题：1、为什么酶切后大多数成3条带（目的片段中没有上述酶切位点）？ 2、酶切前的质粒条带为什么比酶切后的条带还要小？ 请各位高手指点迷津，谢谢！！！  ２０１４０0306meiqiejianding.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有112人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重组质粒双酶切后没有条带
已经有20人回复
- 求助，酶切之后，非但是没有产物，而且连原本的质粒也没跑出来
已经有6人回复
- 用的pCDNA-5重组质粒，通过测序检验质粒+目的基因是否构建成功
已经有5人回复
- 提出的质粒跑胶大小偏差严重，单切后跑胶大小正常，请问这现象正常吗？
已经有5人回复
- XhoI和BamHI双酶切问题
已经有16人回复
- 双酶切切出来三条带
已经有31人回复
- 酶切、连接和转化
已经有9人回复
- pet28a双酶切出现这种情况
已经有10人回复
- pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。
已经有23人回复
- 如何提高PET-28a质粒提取浓度？
已经有13人回复
- 酶切酶连转化后单克隆检测不对
已经有8人回复
- 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事？
已经有19人回复
- Hind111 与 Not1双酶切请教 急急急！！！
已经有13人回复
- 【求助/交流】双酶切电泳条带拖尾严重，什么原因啊？
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
已经有18人回复
- 【求助/交流】pET-28a的酶切位点
已经有6人回复
- 【求助/交流】酶切后无任何条带是什么原因？
已经有8人回复
- 【求助/交流】怎么判断质粒的大小
已经有3人回复
- 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
已经有9人回复
5楼2014-03-09 10:32:38
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8052.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-07 12:02:01
1296785943: 金币+5, ★有帮助 2014-03-09 10:01:50
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-07 12:02:01
1296785943: 金币+5, ★有帮助 2014-03-09 10:01:50
|
你的问题 1载体酶切后一般是两部分，一大一小，如果总是三部分，不排除你的质粒上发生了突变，产生新的位点 2质粒环状跑得快，线性载体跑得慢。切开后，往往会出现质粒大小在中间，载体在上面，目的片段在下面的情况 额外说点 1 我觉得你的体系小了点。 我作载体酶切，一般都是十几二十的质粒，然后酶量也少了些，多加点 毕竟酶切后，电泳上样要多点 2 貌似你的电泳效果不好 可能问题是制胶问题，以及电泳液不干净 3 我经常过夜酶切 |
2楼2014-03-07 10:42:41
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 15:31:51
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 15:31:51
|
第一个问题：一种是你双酶切体系问题，酶切不完全，存在未被双切的质粒，所以有3条带；还有一种可能就是质粒上碱基发生了突变，产生一个BamHl或者Sall的酶切位点（这个可能性很小）。 第二个问题：质粒被切成线性，比未切之前（超螺旋）跑的慢是没有问题的。质粒有三种构型。第一种是共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA，ccc DNA)，它的两条链都保持完整的环状结构，通常呈超螺旋构型。第二种是开环DNA(open circularDNA，oc DNA)，它的双链中的一条保持完整的环状结构，另一条单链上有一到几个切口。第三种是线状DNA，这种质粒的双链断裂呈线状。这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时，出现不同的迁移速率，走得最快的是超螺旋构型，其次是线性构型，最慢的是开环构型。 PS:楼主的双酶切体系模板量太大，10ul总体系太小，建议重新更换体系试试。 |
3楼2014-03-07 12:43:57
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2014-03-07 15:02:31
